PCR-RFLP检测基因多态性的机理和主要实验步骤?
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发布时间：2022-04-23 06:11
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热心网友
时间：2023-07-15 05:45
基因多态性的产生原因是一个也可以是多个核酸序列有所差异，而不产生显性的生物结果．
造成的对于实验原理的影响是，该差异通常造成产生一个酶切位点的特性，而无差异则不具有，也可以是原来有，差异后消失．总之可以利用酶切来判断有无这种差异．
PCR的作用主要是扩充酶切原料，所以PCR的引物设计在你下一步要切割的两侧即可，PCR通常的高效扩充大约是复制100-500个BP的产物，当然随着现代技术的提高，也没有必要强行复合这个原则．
另外，由于将来切完了要电泳看，所以最好设计的时候切的位置不在中心．当然这点我觉得不是那么重要了．
PCR完跑跑电泳试试，能清晰看到就好．
然后就内切酶来切，注意避免incomplete digest,就是最好切的时间充足BUFFER浓度要正确．
切完了跑，能看出不同的，就是有差异．
举例，原本含有GGACCC，有差异的是GGGCCC，那么原本的不能被APAI 切，有差异的能．
PCR复制，不管是啥，把这段争议的包含在里面，然后APAI切了跑．比如说复制500BP，切了以后理论是200+300
如果完全不切，只见500，那就是没差异序列存在．
如果既有500，也有200 +300， 那么就可能是一个序列有，另外一个无．当然，也可能是酶切不彻底，要避免．
如果只有200+300，那么就是两个序列都有．
最后基本上定论还是需要SEQUENCING来定． RFLP常常是用来SCREENING一下．
