・药物研究・ ２０１ ２年１月第２卷第２期 盐酸小檗碱前体脂质体的制备及理化性质研究 杨平 林珈好 王玉蓉 北京中医药大学中药学院，北京１００１０２ 【摘要】目的制备盐酸小檗碱前体脂质体，并对其理化性质进行考察。方法采用薄膜载体沉积法制备盐酸小檗碱前体 脂质体，正交实验优选处方；透射电镜观察形态；马尔文激光粒度仪测定粒径；高效液相色谱法测定包封率。结果电镜 下观察脂质体形态多为圆形或椭圆形，平均粒径为７４１ ｎｍ，包封率为（２９．９３±１．３２）％。结论该方法制备Ｔ艺简单，易 于工业化生产。 【关键词】盐酸小檗碱；前体脂质体；脂质体 【中图分类号】ＴＱ４３．２ 【文献标识码］Ｂ 【文章编号】２０９５—０６１６（２０１２）０２—３２—０３ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ ｐｒｏｌｉｐｓｏｍｅｓ ａｎｄ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｉｔｓ ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ＹＡＮＧ Ｐｉｎｇ ＬＩＮ ｄｉａｈａｏ ＷＡＮＧ Ｙｕｒｏｎｇ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １ ００１０２，Ｃｈｉｎａ ］Ａｂｓｔｒａｃｔ］０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｐｒｅｐａｒｅ ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ ｐｒｏｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ａｎｄ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｉｔｓ ｐｈｙｓｉｃ０ｃｈｅｍｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ． Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｐｒｏｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｗｅｒｅ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｂｙ ｆｉｌｍ—ｄｅｐ０ｓｉｔｉｎｎ ｏｎｃａｒｒｉｅｒｓ．Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｓｅｌｅｃｔ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｓｈａｐｅ ａｎｄ ｐａｒｔｉｃｌｅ ｓｉｚｅ ｏｆ ｐｒｏｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｗｅｒｅ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ ｂｙ ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ ｅｌｅｃｔｒｏｎ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ ａｎｄ ｌａｓｅｒ ｓｃａｔｔｅｒ．Ｔｈｅ ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ ｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｗａｓ ｄｅｔｆｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ＨＰＬＣ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ ｌｉｐｏｓｏｍｅ ｖｅｓｉｃｌｅｓ ｗｅｒｅ ｇｌｏｂｕｌａｒ ｏｒ ｅｌｌｉｐｔｉｃ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ．Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｓｉｚｅ ｏｆ ｔｈｅ ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｗａｓ ７４１ｎｍ．Ｔｈｅ ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ ｅｆｉｃｉｆｅｎｃｙ ｗａｓ（２９．９３±１－３２、％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｓｉｍｐｌｅ ａｎｄ ｅａｓｉｌｙ ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌｉｚｅｄ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］Ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ ｈｙｄｒ０ｃｈｌ０ｒｉｄｅ；Ｐｒ０ｌｉｐ０ｓ０ｍｅｓ；Ｌｉｐ０ｓ０ｍｅｓ 小檗碱（ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ）又称黄连素，常用于治疗肠道炎症。现 代研究发现它对于心律失常、高血压、高脂血症、糖尿病和肿瘤 等也具有较好的治疗作用ＩＩＩ。但由于盐酸小檗碱口服血药浓 度低，维持时间短，难以达到有效的治疗浓度，若长期大剂量给 １１０７１３—２００９１１）；盐酸小檗碱提取物（四川什邡鸿鸣药物原 料有限公司）；Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ一５０ ｃｏａｒｓｅ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ进口分装）； Ｌｉｐｏｉｄ￥７５天然大豆磷脂（德国Ｌｉｐｏｉｄ公司，纯度＞７５％）；胆 固醇（Ａｍｒｅｓｃｏ分装）；麦芽糖糊精Ｍａｈｒｉｎ Ｍ７００（Ｇｒａｉｎ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ 药，又会产生诸多不良反应。１９８６年，英国学者Ｐａｙｎｅ等 首 次提出了前体脂质体（ｐｒｏｌｉｐｏｓｏｍｅｓ）这一概念，是指将脂质材 料吸附于水溶性载体上，制备成的干燥颗粒或粉末。当口服给 药时，与体液接触，脂质溶胀而载体迅速溶解，在水相中形成脂 质体，能促进药物的吸收 。为解决盐酸小檗碱吸收差及生物 利用度低和普通脂质体不稳定等问题，本实验首次探讨了盐酸 小檗碱前体脂质体的制备Ｔ艺并对其理化性质进行研究。 Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ赠样）；乙腈（色谱纯）；其他试剂为分析纯。 ２方法与结果 ２．１ 盐酸小檗碱前体脂质体的制备 ２．１．１ 制备方法 采用薄膜载体沉淀法制备：称取处方量的 磷脂、胆固醇及盐酸小檗碱适量，溶于无水乙醇中，形成澄明溶 液。另取适量麦芽糖糊精（载体）置１００ ｍＬ网底烧瓶中，于旋 转蒸发仪上快速转动３０ ｍｉｎ（４０～５０ ）至呈流动态，分次向 载体粉末中加入上述澄明溶液适量，旋转蒸发至干。置真空 燥器巾干燥过夜，即得盐酸小檗碱前体脂质体，取 密闭于两 林瓶巾，置冰箱４ｃＣ保存，备用。取前体脂质体加适量蒸馏水水 １仪器与试药 日本岛津高效液相色谱仪（ＬＣ一２０ＡＴ四元泵、ＣＴＯ一 １０ＡＳＶＰ柱温箱、ＳＰＤ一２０Ａ紫外检测器）；７５２紫外可见分光光 度计（上海现科分光仪器有限公司）；ＲＥ一２０００Ａ型旋转蒸发器 （上海亚荣生化仪器厂）；ＳＨＺ—Ｄ（ＩＩＩ）循环水式真空泵（巩义市英 峪予华仪器厂）；ｐＩ－ｋＳ－３Ｃ精密酸度计（上海伟业仪器厂）；ＢＳ１１０Ｓ 型１，万电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）； ＪＥＭ一１２３０透射电子显微镜（日本电子公司）；Ｚｅｔａｓｉｚｅ 合，振摇混合均匀至呈无不溶性颗粒，即得脂质体混悬液。 ２．１．２ 正交设计实验通过大量预实验，初步拟定了盐酸小 檗碱前体脂质体的制备Ｔ艺。为确定最优处方，以包封率为指 标，以磷脂药物比（Ａ）、磷脂胆同醇比（Ｂ）、载体磷脂比（Ｃ）为 考察冈素，每个［大１素选择３个水平，选用Ｌ （３ ）正交表进行 ＮａｎＯ ＺＳ纳米粒度仪（英国马尔文）；Ｏｌｙｍｐｕｓ ＣＸ２１型显微镜 （日本）。 实验。见表１。方差分析结果表明，３个因素对脂质体包封率 的影响均不显著。故依据极差分析结果，确定最优水平组合为 Ａ Ｂ Ｃ ，即磷脂／药物为８：１，磷脂／胆固醇为４：１，载体／ 磷脂为２：１。见表２、３。 盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号 通讯作者 ３２十一五药斜詈ＣＨｔＮＡ ＭＥＤＩＣＩＮＥ ＡＮＤ ＰＨＡＲＭＡＣＹ ２０１ ２年１月第２卷第２期 ・临床研究・ 表２ ５８例早期鼻￣ＮＫｑ－细胞淋巴瘤患者多因素分析 血红蛋白生成，提高局部氧浓度，可能会对于肿瘤的治疗起 到一定作用。… 综上所述，对于鼻型ＮＫ／Ｔ细胞淋巴瘤而言，由于对化疗不 敏感，单纯放疗仍是目前治疗的主要手段。通过放疗达到完全 缓解，然后再根据具体病情适当给予化疗。但对于已发生远处 转移的患者，治疗效果仍不佳，因此探索更为有效而全身副作 性的一类与ＥＢ病毒感染相关的淋巴瘤，多发生于亚洲，其具有 独特的临床表现和体征，肿瘤侵犯以血管为中心，常伴有灶性 坏死以及血管破坏【２】。该病常发生远处转移，因此曾有文献报 用较小的治疗方案仍任重道远。同时，也要考虑影响患者预后 的一些临床指标，联合考虑，制定符合患者病情的个性化治疗 方案，以期达到最好的治疗效果。 【参考文献】 …１唐琼兰，刘卫平，李甘地，等．西南地区鼻ＮＫ／Ｔ细胞淋巴瘤的临床病理特 征及预后分析［Ｊ】．肿瘤，２００３，（２３）：４１１－４１３． ［２］Ｌｉ ＣＣ，ＴｉｅｎＨＦ，Ｔａｎｇ ＪＬ，ｅｔ ａ１．Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｕｔｃｏｍｅ ａｎｄｐａｔｔｅｒｎ ｏｆｆａｉｌｕｒｅ，ｉｎ ７７ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｓｉｎｏｎａｓａｌ ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ／Ｔ－ｃｅｌｌ ｏｒ Ｔ－ｃｅｌｌ ｌｙｍｐｈｏｍａ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ， ２００４，１００（２）：３６６—３７５． 道应联合放疗和化疗综合疗法，但是本研究以及国内外多篇文 献报道，联合疗法和单纯放疗对于患者的生存率以及预后并未 发生变化，而以放疗为主的治疗仍然是治疗鼻型ＮＫ／Ｔ细胞淋 巴瘤的主要手段。对于化疗不敏感的原因分析，主要可能是与 Ｐ５３基因突变 、血管损害以及多耐药基因表达有关。及时早 期的病情也不易控制，常至疾病扩散至肠道、睾丸、皮肤等全身 多个部位。 ｆ３崔晓波，梁传余．３１１８例原发鼻腔和鼻窦的Ｔ／ＮＫ淋巴瘤的临床分析［Ｊ】．临 床耳鼻咽喉科杂志。２００４，１８（１１）：６５１—６５２． 鼻型ＮＫ／Ｔ细胞淋巴瘤预后因素最为主要的是临床分 期、肿瘤侵犯范围以及首程治疗后完全缓解率。罗杨坤等１４－５１ 【４］罗杨坤，谭燕，付彬玉，等．鼻腔ＮＫ／Ｔ细胞淋巴瘤的疗效及预后分析【ＪＪ． 中国现代医生，２０１０，４８（４）：６—７． ［５］祝琳，黎万荣．鼻型ＮＫ／Ｔ细胞淋巴瘤ｌ９例临床分析［Ｊ】．中国现代医生， ２００９，４７（２１）：ｌ８—１９． 报道，肿瘤ＮＨＬ分期与预后具有密切相关性。对于同是Ｉ期 肿瘤，超腔比局部预后差。而首程治疗以后完全缓解率也是 影响预后的一个重要因素，本研究中完全缓解和未完全缓解 患者５年生存率分别为７２．２％和１３．３％，差异具有统计学意 义。治疗前后血红蛋白浓度是影响患者预后的独立因素『６１， 因此，对于淋巴瘤这类血液系统源性的恶性肿瘤疾病，血红蛋 ［６］Ｒｉｈｒａｇ Ｖ，ＥＩｌ Ｈａｊｊ Ｍ，Ｊａｎｏｔ Ｆ，ｅｔ ａ１．Ｅａｒｌｙ ｌｏｃｏｒｅｇｉｏｎａｌ ｈｉｇｈｄｏｓｅ ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｌｏｎｇ—ｔｅｒｍ ｄｉｓｅａｓｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｉｎ ｌ￣ａｌｉｚｅｄ ｐｒｉｍａｒｙ ａｎｇｉｏｅｅｎｔｉｆｅ ｌｙｍｐｈｏｍａｏｆｔｈｅ ｎｏｓｅ ａｎｄ ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｘ［Ｊ］．Ｌｅｕｋｅｍｉａ。２００１。（１５）：１１２３—１１２６． ［７１ Ｌｅｅ Ｊ，Ｓｕｈ Ｃ，Ｐａｒｋ ＹＨ，ｅｔ ａ１．Ｅｘｔｒａ ｎｏｄａｌ ｎａｔａｌ－ｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ Ｔ—ｃｅＩｌ ｌｙｍｐｈｏｍａ． ｎａｓａｌ ｔｙｐｅ：ａ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｍｏｄｅｌ ｆｒｏｍ ａ ｒｅｔｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｍｕｌｔｉｅｅｎｔｅｒ ｓｔｕｄｙ［Ｊ］．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ，２００６，２４：６１２—６１８． 白可能是一个不可忽视的重要因素。当体内血红蛋白含量降 低，乏氧细胞数量会增加，从而导致对化疗以及放疗的普遍不 敏感，降低治疗效果，这主要是由于局部血氧浓度降低造成。 因此，如果给予患者一定剂量的促红细胞生成素治疗【７］，促进 （收稿日期：２０１１—１１－０９） （上接第３３页） 【参考文献】 ［１】郝乘仪，李妍，张秀荣．小檗碱药理作用研究进展【Ｊ］．吉林医药学院学报， ２００８，２９（５）：２９５—２９７． ［２】Ｐａｎｙｅ ＮＩ，Ｔｉｍｍｉｎｓ Ｐ，Ａｍｂｒｏｓｅ ＣＶ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｏｌｉｅｓｏｍｅｓ：ａ ｓｐｏｌｕｔｉｏｎ ｔｏ ａｎ ｏｌｄ ３讨论 本研究选择载体沉淀法制备前体脂质体，曾考察山梨醇、 甘露醇、葡萄糖、１３一环糊精、氯化钠、麦芽糖糊精作为载体，结 果显示采用麦芽糖糊精不仅外观较好，且负载量较大，包封率 也相对较高，故确定采用麦芽糖糊精为载体。 ｐｒｏｈｌｅｍ￣］．Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ，１９８６。７５（４）：３２５． ［３］王健，李明轩．前体脂质体研究进展【Ｊ】．中国医药工业杂志，２００５，３６（１１）： ７０７－７ｌ１． 前体脂质体的制备方法 般对于脂溶性药物包封率较高， 可达９０％以上，如尼莫地平为９５％ ，而对于水溶性和难溶性 ［４］夏萌申，黄莉颖，殷璐璐．尼莫地平前体脂质体的制备和大鼠药动学的研 究【Ｊ］．华西药学杂志，２００２，１７（２）：９８—１００． ［５］Ｂｙｕｎｇ—Ｎａｋ Ａｈｎ，Ｋｉｍ ＳＫ，Ｓｈｉｍ ＣＫ．Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｆ ｏｐｒｏｌｉｅｓｏｍｅｓｐ 药物包封率普遍较低，如盐酸普奈洛尔前体脂质体水化后的包 封率仅为１０％ｌ ５ｌ，利巴韦林为２８％ｔ ，葛根素为４３．５３％１７１等。由 于盐酸小檗碱为强酸强碱盐，水溶性脂溶性均不好，可能是导 致包封率较低的主要原因。但是本研究首次尝试将盐酸小檗 ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ ｈｙｄｒｏｅｈｉｏｒｉｄｅ［Ｊ］ｄ Ｍｉｅｒｏｅｎｅａｐｓｕ，１９９５。１２（４）：３６３－３７５． ［６］于海翔，郭俊，李宁，等．利巴韦林脂质体在大鼠体内的药物动力学及其生 物利用度［Ｊ］．沈阳药科大学学报，２００１，ｌ８（５）：３２０—３２３． 碱制成Ｅｌ服前体脂质体，成功解决了液体脂质体不稳定的问 题，且制法简便、适于工业化生产，为盐酸小檗碱治疗其他疾病 【７］宋金春，刘薇芝，黄岭．葛根素前体脂质体的制备及体外性质研究【Ｊ】．中 国药学杂志，２００７，４２（１５）：１１５５—１１５８． 拓宽了剂型研究途径。盐酸小檗碱前体脂质体动物体内的吸 收和生物利用度研究正在进行中。 （收稿日期：２０１１－１１－２５） ＣＨＩＮＡ ＭＥＤＩＣＩＮＥ ＡＮＤ ＰＨＡＲＭＡＣＹ十一‘为斜荸４１