齐鲁药事・Ｑｉｌｕ Ｐｈａｌ 一 ・ １ 兰 ！ ： ： ：！ ・５３９・ 液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算。 ３批供 ３讨论 试品的测定结果见表ｌ。 供试品中ＡＣ因含有巯基。易被氧化，其含量随时间的 表１ 供试品含量（相当于标示量的 ）测定结果（ｎ一２） 延长而降低，批号为２Ａｏ８ｏ３１９ｏ３的供试品起始含量为 １０７．ｉ ，存放ｉ年半后含量已降至９０．９ 。故在生产时应 控制含量高一些（规定限度为８０．Ｏ％～１２０．０％）。 甲醛残留检验方法研究 程春萍，刘海萍，王水莲 （山东齐都药业有限公司，山东淄博２５５４００） 摘要：目的通过对用乙酰丙酮光度测定甲醛含量方法的研究，确定甲醛残留量用该检验方法检测的线性、灵敏度和回 收率（准确度）。确保该方法对甲醛残留浓度检测结果的准确性。方法 乙酰丙酮光度法，本方法的最低检出浓度为０．０４ｍｇ ・Ｌ 甲醛；测定上限为３．２０ｍｇ・Ｌ一 甲醛。结果 该方法的线性范围是０～３．２ｇ・ｍＬ～，检测方法的回收率为９８．９％，定 量限为０．０４１３＃ｇ・ｍＬ一 ，确定了凡残留量浓度在０．Ｏ４～３．２＃ｇ・ｍＬ＿１的范围内，均可采用此方法检测。结论 此方法操作 简单，精密度、准确度、重复性较好。 关键词：甲醛残留；乙酰丙酮光度法 中图分类号：Ｒ９２７ １１文献标识码：Ａ文章编号：１６７２—７７３８（２０１０）０９—０５３９—０３ Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ＣＨＥＮＧ Ｃｈｕｎ—ｐｉｎｇ，ＬＩＵ Ｈａｉ—ｐｉｎｇ，ＷＡＮＧ Ｓｈｕｉ—ｌｉａｎ （Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｑｉｄｕ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｚｉｂｏ ２５５４００） ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ Ｔｈｒｏｕｇｈ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｆ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ Ｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ ｂｙ Ａｃｅｔｙｌａｅｅｔｏｎｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄ， ｗｅ ｍａｋｅ ｓｕｒｅ ｔｈｅ￣ｉｎｅａｒｉｔｙ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｒｅｃｏｖｅｒｙ（ａｃｃｕｒａｃｙ）ｕｓｉｎｇ ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｔＯ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ｒｅｓｉｄｕａｌ ｑｕａｎｔｉｔｙ ｏｆ Ｆｏｒｍａｌｄｅ— ｈｙｄｅ，ｔＯ ｅｎｓｕｒｅ ｔｈａｔ ｔｈｅ ａｃｃｕｒａｃｙ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ ｒｅｓｉｄｕｅｓ．ＭＥＴＨＯＤＳ Ａｃｅｔｙｌａｃｅｔｏｎｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄ，ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｌｉｍｉｔ ｏｆ ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ０．０４ｍｇ・Ｌ一 ；ｔｈｅ ｍａｘｉｍｕｍ ｄｅｔｅｃｔａｂｌｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ３．２０ｒａｇ・Ｌ。。．ＲＥＳＵＬＴＳ Ｔｈｅ ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇｅ ｏｆ ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ０．０４～３．２＃ｇ・ｍＬ＿ ：ｔｈｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ９８．９ ，ｔｈｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｌｉｍｉｔ ｗａｓ ０．０４１３￣ｇ・ｍＬ～．Ｔｈｅ ｃｏｍｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｌｉｍｉｔ ｗａｓ ０．０４ｐｇ・ｍＬ。。ａｎｄ ｔｈｅ ｔｅｓｔ ｓａｍ— ｐｌｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｗｉｔｈｉｎ ０～３．２＃ｇ・ｍＬ＿。，ｃａｎ ｂｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ Ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｓｉｍｐｌｅ，ｐｒｅｃｉｓｅ， ａｃｃｕｒａｔｅ ａｎｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ． ＫＥＹ ＷＯＲＤＳ：Ｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ ｒｅｓｉｄｕｅｓ；Ａｃｅｔｙｌａｃｅｔｏｎｅ ｓｐｅｅｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄ 生产羟乙基淀粉系列产品时，在超滤工序，超滤膜如停 恒温水浴锅（济宁海腾超声电子设备有限公司）；乙酰丙酮 用超过７天，为抑制超滤膜的细菌繁殖，采用１％甲醛溶液 （分析纯）（天津永大化学试剂有限公司）。 浸泡保护，但超滤膜浸泡后使用前如甲醛清洁不彻底会残留 ２检测方法 到产品中，对人体产生不良影响，因此每次清洁后甲醛残留 乙酰丙酮分光光度法。 的检测至关重要。通过本方法的检测，可以准确地检测出甲 方法原理：在过量铵盐存在下，甲醛与乙酰丙酮生成黄 醛残留含量，以确认清洁是否达到０．０５＃ｇ・ｍＬ 的残留量 色化合物，该有色化合物在波长４１４ｎｍ处有最大吸收。在 规定要求。 显色条件下表观摩尔吸光系数为７．２×１Ｏ。Ｌ・ｍｏｌＩ１・ｃｍＩ１ ｌ仪器与试药 有色物质在３ｈ内吸光度基本不变。本方法的最低检出浓度 ＵＶ２５５０紫外一可见分光光度计（日本岛津公司）； 为０．０４ｍｇ・Ｌ 甲醛；测定上限为３．２０ｍｇ・Ｌ 甲醛。 ＢＰ２ｌ１Ｄ电子天平（德国赛多利斯公司）；ＤＫ一９８—１型电热 ２．１溶液的制备 ・５４０・ 齐鲁药事・Ｑｉｌｕ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｆｆａｉｔｓ ２０１０ １１ｏ１．２９，Ｎｏ．９ ｍＬ ），用水稀释成每毫升含甲醛１０．３２５ｐｇ的标准使用液。 精密量取甲醛标准使用液０、０．２０、０．５０、１．Ｏ０、３．Ｏ０、５．Ｏ０、 ８．ｏ０于２５ｍＬ比色管中，加水至标线，制成浓度分别为０、 ０．０８２６、０．２０６５、０．４１３、１．２３９、２．０６５、３．３０４￣ｇ・ｍＬ一。再 ２．１．１碘标准液（１／２＝０．０５ｔｏｏｌ・Ｌ－ ）：称取２０ｇ碘化钾溶 于少量水中，加入６．３５ｇ碘，待溶解后，稀释至ｌＯ００ｍＬ。 ２．１．２乙酰丙酮溶液：将５０ｇ乙酰胺，６ｍＬ冰醋酸及０．５ｍＬ 乙酰丙酮试剂溶解于ｌＯＯｍＬ水中。本溶液置冰箱中２～５＂Ｃ 保存，有效期为１个月。 ２．１．３甲醛标准贮备液：吸取２．８ｍＬ甲醛溶液（内含甲醛 ３６ ～３８ ），用水稀释至ｌＯ００ｍＬ，此溶液每毫升约含甲醛 向每管中加入２．５０ｍＬ乙酰丙酮溶液，混匀。于４５￣６０℃水 浴中加热３０ｍｉｎ，取出冷却。于波长４１４ｎｍ处以水为参比， 用ｌｃｍ比色皿测量吸光度。进行线性关系的考察，结果见 表１。 裹１ 甲醛含量测定线性关系及范围实验结果 ｌｍｇ。标定方法为：吸取甲醛贮备溶液２Ｏ．ＯＯｍＬ于２５０ｍＬ 碘量瓶中，加入０．０５ｍｏｌ・Ｌ 碘标准溶液５０ｍＬ，４ 氢氧化 钠溶液１５ｍＬ，加塞，混匀放置１５ｍｉｎ，加３ 硫酸２０ｍＬ，混 匀再放置１５ｍｉｎ。用０．０５ｍｏｌ・Ｌ 硫代硫酸钠滴定液滴 定，至溶液呈淡黄色时，加１ 淀粉溶液１ｍＬ，继续滴定至蓝 色刚好褪去。同时做空白试验 按下式计算甲醛的浓度： 甲醛（嘴・Ｌ－＇）一 式中：Ｖｔ——空白消耗硫代硫酸钠溶液（ｍＬ）； Ｖｚ——标定甲醛消耗硫代硫酸钠溶液（ｍＬ）； Ｍ——硫代硫酸钠滴定液的实际浓度，ｔｏｏｌ・Ｌ ； １５——甲醛（１／２ＨＣＨ０）摩尔质量； ２Ｏ．Ｏ——甲醛标准贮备液取样体积，ｍＬ。 ２．１．４甲醛标准使用液：用水将一定量的甲醛标准贮备溶液 逐级稀释成每毫升含甲醛１０．Ｏｐｇ的标准使用液。临用新 制。 ２．２检测 ２．２．１供试品取样：供试品可用玻璃瓶或聚乙烯瓶采集。为 抑制甲醛的分解，采样后于每５００ｍＬ水样中加入１ｍＬ浓硫 酸酸化，并应在２４ｈ内测定。 ２．２．２标准曲线的绘制： ２．２．２．１取７支２５ｍＬ比色管，分别加入０、０．２Ｏ、０．５０、 １．Ｏ０、３．Ｏ０、５．Ｏ０、８．ＯＯｍＬ甲醛标准使用液，加水至标线。加 入２．５ＯｒａＬ乙酰丙酮溶液，混匀。于４５～６０￣Ｃ水浴中加热 ３０ｍｉｎ，取出冷却。于波长４１４ｎｍ处以水为参比，用ｌｃｍ比 色皿测量吸光度。以浓度为纵坐标，吸光度为横坐标绘制曲 线。 ２．２．２．２供试品测定：取２５ｍＬ供试品于２５ｍＬ比色管中，加 入２．５ＯｒａＬ乙酰丙酮溶液，混匀。于４５～６Ｏ℃水浴中加热 ３０ｒａｉｎ，取出冷却。于波长４１４ｎｍ处以水为参比，用ｉｃｍ比 色皿测量吸光度。同时做空白校正。 ２．２．２．３计算：甲醛（ｍｇ・Ｌ－ ） 式中：ｍ——由标准曲线查得的甲醛量（ ｇ）； Ｖ——供试品体积。 ３方法验证结果 ３．１线性关系及范围 取甲醛标准贮备溶液（１．０３２５ｍｇ・ 以吸光度为横坐标，以浓度为纵坐标绘制标准曲线进行 回归处理，得线性方程：Ｙ一４．３５４３ Ｘ一０．０１９４，相关系数ｒ ＝１。结果表明溶液在０～３．２ ｇ・ｍＬ 的浓度范围内，吸 光度与浓度呈良好的线性关系。 ３．２检测方法的回收率及准确度 精密量取甲醛标准使用 液，用水配制成浓度为０．０７２、０．０９、０．１０８＃ｇ・ｍＬ 供试品 溶液。每个浓度平行配制三份，在４１４ｎｍ处检测吸光度，再 从标准曲线中查得０．０９Ｍｇ・ｍＬ 甲醛溶液的吸光度为 ０．０２５，以０．０９ ｇ・ｍＬ 甲醛溶液的吸光度为对照，计算平 均回收率（要求ＲＳＤ＜５ ）。其实验结果见表２。 表２ 甲醛含量测定回收率及准确度实验结果 从上述回收率试验结果可知，本方法回收率及准确度试 验良好。 ３．３精密度 ３．３．１重复性：取０．２０６５￣ｇ・ｍＬ－１的甲醛溶液，照“紫 一 可见分光光度法”在４１４ｎｍ的波长处测定吸光度，重复操作 六次，六次测定结果的ＲＳＤ，应小于２ ，试验结果见表３。 表３ 甲醛含量测定重复性实验结果 以上结果可以看出重复性良好。 ３．３．２稳定性：将“重复性”试验项下的供试品溶液放置５ｈ 后，每隔１ｈ检测吸光度，计算６次测定结果的ＲＳＤ，其试验 齐鲁药事・Ｑｉｌｕ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ＾＿ 结果见表４。 表４ ！ ： ： ： ・５４１ ・ ３０ｍｉｎ，取出冷却。于波长４１４ｎｍ处以水为参比，用ｉｃｍ比 甲醛含量测定稳定性实验结果 色皿测量吸光度。重复测定６次，计算６次检测结果的 ＲＳＤ，取满足ＲＳＤ小于ｌＯ 的最低浓度作为该方法的定量 限。其检测结果见表６。 本法测定的吸光度ＲＳＤ为１．４ 且与“重复性”试验检 表６ 甲醛含量测定定量限实验结果 测结果的平均偏差为０．９ ，从实验结果可知供试品制备后 ５ｈ内测定，结果无明显变化，在此时间内，待测组分化学物 质稳定。 ３．４专属性精密量取０．２ｍＬ甲醛标准使用液（１０．３２５ｐｇ ・ｍＬ ）４份，分别置于２５ｍＬ比色管中，取１支作为对照， 根据检测结果，０．０４１３￣ｇ・ｍＬ 检测值的ＲＳＤ为 其余３支分别加入２５ ｇ丙醛、２５ ｇ丁醛、２Ｏ ｇ乙醛，用水分 ４．５ ，可以作为该方法的定量限。０．０４１３￣ｇ・ｍＬＩ１的定量 别稀释至刻度摇匀，再向每管中加入２．５０ｍＬ乙酰丙酮溶 限足够满足于不低于０．０５ｐｇ・ｍＬ 的残留量检测。 液，混匀。于４５～６Ｏ℃水浴中加热３０ｍｉｎ，取出冷却。于波 ４验证结论 长４１４ｎｍ处以水为参比，用ｌｃｍ比色皿测量吸光度，其实验 根据以上检验结果，知该检测方法的线性、回收率、精密 结果见表５。 度与重复性符合要求；定量限为０．０４１３￣ｇ・ｍＬ＿。。确定了 表５ 甲醛含量测定专属性实验结果 凡残留量高于０．０４ｐｇ・ｍＬ 且供试品浓度在０．０４～ ３．２ ｇ・ｍＬＩ１的范围内，均可采用此方法检测。 参考文献 Ｅｌｉ国家食品药品监督管理局药品安全监管司，国家食品药品监督管 根据检测结果，表明在向含甲醛溶液中加人乙醛、丙醛、 理局药品认证管理中心，药品生产验证指南（２００３）．北京：化学 丁醛４种物质时，吸光度的ＲＳＤ为２．０ ，证明该溶液的专 业ｆ＿｝；版社． 属性符合规定。 Ｅ２－１国家环境保护总局《水和废水监测分析方法》编委会．水和废水监 ３．５定量限精密量取甲醛标准使用液（１０．３２５￣ｇ・ｍＬ ） 测分析方法（第四版）．北京：中国环境科学出版社，２００２． ０．１０、０．１５、０．２０ｍＬ于２５ｍＬ比色管中，加水至标线，制成浓 Ｅ３］国家药典委员会．中华人民共和国药典２００５年版（一部）［ｓＪ．北 度分别为０．０４１３、０．０６１９５、０．０８２６￣ｇ・ｍＬ＿ 。再向每管中 京：化学工业｛＿Ｉ＿｛版社，２００５． 加入２．５０ｍＬ乙酰丙酮溶液，混匀。于４５～６Ｏ℃水浴中加热 国家食品药品监督管理局 药品标准信息 药品名称 剂型 规格 注册分类 药品标准 药品生产企业 药品批准文号 药品批准 文号有效期 化学药品 中国药典 山东省泰安制药 葛根索注射液 注射剂 ５ｍＬ：２５０ｍｇ 第６类 ２０００年版２００２ 厂 国药准字Ｈ２００４６４２６ 至２００９年１２月２１日 增补本 注射用头孢硫脒 注射剂 ２．０ｇ 第６类 化学药品 ２００５年版 中国药典 山东罗欣药业股 份有限公司 国药准字Ｈ２００５９５６３ 至２０１０年Ｉ２月Ｉ２日 （按Ｃ１９Ｈ２ｓＮ４Ｏ６ｓ２计算） 注射用头孢噻吩钠 注射剂 ２．Ｏｇ（按Ｃ］６ＨｉｓＮ２Ｎａ０６Ｓ２计算） 化学药品 中国药典 第６类 ２０００年版 份有限公司 山东罗欣药业股 国药准字Ｈ２ｏｏ５３１ｏｏ 至２ＯｌＯ年Ｏ１月１１日 羟乙基淀粉０．４ １３０／ 化药６类 ＹＢＨ０９８２２００９ 山东齐都药业有 限公司 国药准字Ｈ２００９０３６ｌ 至２０１４年ｉ２月０７日 羟乙基淀粉ｏ．４氯化钠注射液 １３ｏｌ 注射剂 ２５０ｍＬ：羟乙基淀粉ｏ．４ １５ｇ与氯化钠２．２５ｇ Ｉ３０／ 化药６类 ＹＢＨ０９８３２００９ 山东齐都药业有 限公司 国药准字Ｈ２００９０４１３７ 至２０１４年１２月０７日 硝酸咪康唑栓 栓剂 ｏ．２ｇ 化药６类 ＹＢＨ０９４１２００９ 山东仙河药业有 限公司 国药准字Ｈ２００９４１０５ 至２０１４年ｉ１月２４日 头孢克肟片 片剂 （１）５０ｒａｇ、（２）１００ｍｇ 化药６类 ＹＢＨ０９４７２００９ 份有限公司 山东罗欣药业股 （１）国药准字Ｈ２００９４１１５（２）国药准字Ｈ２００９４１Ｉ６ 至２０１４年１１月２４日 甲磺酸帕珠沙星氯 注射剂 １００ｍＬ：甲磺酸帕珠沙星 化药３化钠注射液 （以帕珠沙星计）０．１ ＹＢＨ０９３８２００９ ．５ｇ与氯 类 业有限公司 山东鲁抗辰欣药 国药准字Ｈ２ｏｏ９ｏ３５５ 至２ｏ１４年ｌ１月２４日 化钠０．９ｇ