大葱提取物对微生物抑制作用的研究

科学研究　食品研究与开发　２０Ｄ　／．２８．￣０．０６　６５＝＝＿Ｉ　大葱提取物对微生物抑制作用的研究　韩春然　（哈尔滨商业大学食品工程学院，黑龙江哈尔滨１５００７６）　摘要：以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、白色葡萄球菌、粘红酵母、黑曲霉为对象，研究了大葱的总提取物、蛋白成分、脂　溶性成分及多糖成分的抑茵能力。结果表明，大葱总提取物对细菌和真菌均具有抑制作用，其中对白色葡萄球菌具　有很强的抑制作用，对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌也有一定的抑制作用，对粘红酵母黑曲霉也具有抑制能力；大葱脂　溶性成分对细菌和真菌均具有抑制作用，大葱蛋白成分和多糖成分对细菌和真菌均没有抑制作用。研究表明，大葱　中的抑茵成分主要为脂溶性成分。　关键词：大葱；提取物；抑茵　ＳＴＵＤＹ　ＯＮ　ＴＨＥ　ＡＮＴＩＭＩＣＲＯＢＩＡＬ　ＡＣＴＩＶＩＴＹ　ＯＦ　ＴＨＥ　ＥＸＴＲＡＣＴ　ＦＲＯＭ　ＷＥＩＳＨ　ＯＮＩＯＮ　ＨＡＮ　Ｃｈｕｎ—ｒａｎ　（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｆｏｏｄ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｈａｒｂｉｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｏｍｍｅｒｃｅ，Ｈａｒｂｉｎ　１　５００７６，Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｕｓｉｎｇ　Ｅ　ｃｏｌｉ，Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｕｂｔｉｌｉｓ，Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ｃａｎｄｉｃａｎｓ，Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒ，ａｎｄ　Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ　ｍｌｚ－　ｃｉｌａｇｉｎｏｓａａｓｏｂｊｅｃｔｉｖｅｓ，ｔｈｅ　ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｏｆｗｅｌｓｈ　ｏｎｉｏｎ（Ａ　Ｚｌｉｕｍ　ｓｔｕｌｏｓｕｍＬ．）ｗａｓ　ｓｔｕｄｉｅｄ．　Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ，ｔｈｅ　ｗｈｏｌｅ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｆｒｏｍ　ｗｅｌｓｈ　ｏｎｉｏｎ　ｈａｄ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ｂｏｔｈ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ａｎｄ　ｆｕｎｇｉ，ａｎｄ　ｉｔ　ｈａｄ　ｓｔｒｏｎｇ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｔｏｗａｒｄ　Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ｃａｎｄｉｃａｎｓ．ｓｏｍｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　Ｅ．ｃｏｌｉ．ｂｕｔ　ｈａｄ　ｎｏ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ日Ⅱｃ　Ｚ—　ｌｕｓ　ｓｕｂｔｉｌｉｓ，ｉｔ　ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ　ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ几　ｒ　ａｎｄ　Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ　ｍｕｃｉｌａｇｉｎｏｓａ．Ｔｈｅ　ｆａｔ　ｓｏｌｕｂｌｅ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｈａｄ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ａｎｄ　ｆｕｎｇｉ，ｗｈｅｒｅａｓ　ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ａｎｄ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｂａｄ　ｎｏ　ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ａｃｔｉｖｉ—　ｔｙ，ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｗｅｌｓｈ　ｏｎｉｏｎ　ｗａｓ　ａｔｔｉｂｕｔｅｄ　ｒｔｏ　ｉｔｓ　ａｔ　ｆｓｏｌｕｂｌｅ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｗｅｌｓｈ　ｏｎｉｏｎ（Ａｌｌｉｕｍ　ｓｔｕｌｏｓｕｍ　Ｌ．）：ｅｘｔｒａｃｔｓ；ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　大葱（ＡｌｌｉｕｍｆｉｓｔｕｌｏｓｕｍＬ．ＵＯＩ＇．ｇｉｇａｎｔｅａｍＭａｋｉｎｏ）属　１　Ｍｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８）：帕弗瑞生物技术ａ匕京洧限公司；　甘油（Ｇｌｙｃｅｒｏ１）：宜兴中天助剂厂；　百合科葱属，是以叶鞘组成的肥大假茎和嫩叶为产品　的２～３年生草本植物｝Ｉ】。大葱在我国有的栽培历史长达　聚乙稀吡咯烷酮（Ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｐｏｌｙｐｙｒｏｒｄｏｎｅ）：北京创　信天下生物科技有限公司；　３　０００余年，是世界上主要栽培大葱的国家。我国北方　各省大葱的栽培极为普遍。大葱具有很高的药用价值　［２１。氯仿：九洲化工有限公司；　甲醇：九洲化工有限公司；　明代李时珍《本草纲目》对其功效有非常详细的描　述，现代科学家研究表明：葱能发汗解表，促进消化液　分泌，健胃增食，此外还有较强的杀菌作用，尤其对痢　疾杆菌和真菌的抑制作用更明显，除此之外，葱还有软　化血管、降低血脂的作用。本课题旨在研究大葱的抗菌　氯仿甲醇混合液：按２：１体积比混合；　石油醚：昊科尔公司；　无水硫酸钠：成都东金化学试剂有限公司。　１．１．２菌种　效果，明确抗菌物质的主要成分，为充分利用大葱资　源，研究开发以大葱为基础的保健食品奠定理论基础。　１材料及方法　大肠杆菌（Ｅ　ｃｏｌｉ）、枯草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｓｕ　ｓｕｂ—　ｔｉｌｉｓ）、白色葡萄球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ｃａｎｄｉｃａｎｓ）、黑曲霉　（Ａ　ｓｐｅｒｇｉｌｌｓ　ｕ，）、粘红酵母（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ　ｍｕｅｉｌａｇｉｎｏｓａ）　均由哈尔滨商业大学食品学院微生物实验室提供。　１．１．３培养基　１．１材料　１．１。１原料与试剂　大葱（葱白、葱叶）：市售；　作者简介：韩春然（１９７０一），女（汉），副教授，硕士学位，研究方向：食　肉汤培养基，马铃薯葡萄糖琼脂（ＰＤＡ）培养基。　１．２仪器和设备　无菌操作台：Ｓｍａｒｔｌａｂ上海；　医用高压灭菌机：Ａｑｕａｒｉｕｓ　４０Ｂ上海；　品微生物学。　维普资讯 http://www.cqvip.com

６６　２００７．ＶｏＬ２８．Ｎｏ．ｏ６　恒温培养箱：ＤＨＰ６００武汉；　电热恒温水浴：ＨＨ—Ｓ１常州。　１．３方法　食品研究与并发　１．３．３．３大葱中多糖成分的提取　科学研究　根据文献［２】报道的方法，准确称取１０　ｇ大葱粉置　于５００　ｍＬ烧杯中，加人１００　ｍＬ　８０％乙醇，在８５。Ｃ水　浴条件下回流２　ｈ，倒出回流后乙醇，向残渣重新添加　１００　ｍＬ　８０％乙醇，重复上述步骤，残渣用于提取多糖。　主要步骤包括，残渣加去离子水，水浴，抽滤，滤液旋转　１．３．１菌种活化　１．３．１．１细菌的活化　将供试菌由固体斜面接至肉汤培养基中，振荡后　放于３７。Ｃ培养箱内培养４８　ｈ，活化２～３次。　１．３．１．２真菌的活化　蒸发浓缩，ｓｅｖａｇｅ法去蛋白（氯仿：正丁醇＝４：１），糖液　中加人４倍无水乙醇，４　２００　ｄｍｉｎ离心２０　ｍｉｎ，残渣中　倒人无水乙醇搅拌，４　２００　ｄｍｉｎ离心２０　ｍｉｎ，残渣中加　入丙酮搅拌，４　２００　ｒ／ｍｉｎ离心２０　ｍｉｎ，４０。Ｃ烘干。　１．３．３．４大葱中脂溶性物质的提取　将黑曲霉和粘红酵母分别由斜面接种至马铃薯葡　萄糖培养基中，于２８。Ｃ～３０。Ｃ条件下培养７２　ｈ，活化　２～３次。　１．３．２菌种的计数　细菌和酵母菌采用平板计数法：黑曲霉采用血球　计数板计数法。　１．３＿３大葱提取物的制备　使用氯仿一甲醇提取法［３１。　１．３．４抑菌实验　将大葱各种提取液（总提取物、蛋白成分、脂溶性　成分、多糖成分）制成不同浓度的溶液（５０，１００，２００，　３００，５００　ｍＵＬ），分别取１　ｍＬ，分别加人１　ｍＬ实验菌液　于平板中，将灭菌冷却后的肉汤培养基（细菌）或ＰＤＡ　培养基（真菌）倒人平板，摇匀，放人恒温培养箱３７。Ｃ　培养２４　ｈ～４８　ｈ（细菌）或２８。Ｃ，７２　ｈ（真菌）后计数。以　１　ｍＬ无菌水为对照。　２结果与讨论　１．３．３．１大葱总提取物的制备　将大葱洗净称量，加入等量的水，以组织粉碎机粉　碎，再以胶体磨研磨３　ｍｉｎ，将磨好的大葱浆液在离心机　中离心２０　ａｉｒｎ，离心后提取清液装入烧瓶中密封保存，再　将新鲜的大葱提取物于１００。Ｃ加热２０　ｍｉｎ灭菌备用。　１．３．３．２大葱中蛋白成分的提取　样品１　ｇ大葱总提取液加人３．５　ｍＬ提取液（１　Ｍｔｒｉｓ—　ＨＣＩ（ｐＨ８）：甘油：聚乙稀吡咯烷酮－－－４５　ｍＬ：７５　ｍＬ：６　ｇ），　在研钵中用液氨研磨，研磨后加入提取液中在冰上静　止３　ｈ～４　ｈ。用离心机离心８００　ｒ／ｍｉｎ，４０ｍｉｎ４。Ｃ。离心　２．１　大葱各种提取物对细菌的抑制作用（见表１）　大葱的总提取物浓度在５０　ｍ　时就对白色葡萄　球菌有少量抑制，随着浓度的增加抑制越来越明显，大　葱总提取液对白色葡萄球菌有极大的抑制其生长的能　后提取清液装入烧瓶中密封保存，备用。　加加××表１　不同浓度的各种大葱提取物对细菌（ｃｆｕ／ｍＬ）的作用　Ｔａｂｌｅ　１　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｏｆ　ｗｅｌｓｈ　ｏｎｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｂａｃｔｅｒｉａ　１　１４　３４　６××蛋白Ｐｒｏｔｅｉｎ　１．２８×ｌ０。　１．２８×ｌ０。　１．２８×ｌＯ０　１．２８×１００　１．２８×ＩＯ０　ｌ２８Ｘ１０。　１．２０×ｌ０。　１．２４×１Ｏ０　１．２４×ｌＯ０　１．０４×ｌ００　０．９２×ｌＯ０　１．３２Ｘ　ｌ０。　１．１６×１００　０．９８×１００　１．３６×１００　１．１６×１００　３．９６×ｌ０。　３．９６×１００　３．９６×ｌ００　３．９６×１００　３．９６×１００　３．９６×１００　３．９６×１００　３．９６×ｌ　３．９６×１００　３．９６×１００　３．９６×ｌ０。　３．９６×１０。　３．９６×ｌ０。　３．９６×１００　３．９６×１００　３．９６×１００　３．９６×１００　３．９６×ｌ０。　３．９６×１０。　３．８４×ｌＯ０　３．８４×１００　３．８８×ｌ００　３．４０×１００　３．７６×ｌ００　３．７６×１００　３－３２×１００　３．７２×ＩＯ　３．８８×ｌ００　３．８０×ｌ０。　３．７６×ｌ０　ｌｏｏ　多糖Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　脂溶性物质Ｌｉｐｉｄ　总提取物Ｔｏｔａｌ　ｅｘｔｒａｃｔ　蛋白Ｐｒｏｔｅｉｎ　多糖Ｐｏｌｙｓａｃｅｈａｒｉｄｅ　脂溶性物质Ｌｉｐｉｄ　总提取物Ｔｏｔａｌｅｘｔｒａｃｔ　蛋白Ｐｒｏｔｅｉｎ　多糖Ｐｏｌｙｓａｃｅｈａｒｉｄｅ　脂溶性物质Ｌｉｐｉｄ　总提取物Ｔｏｔａｌ　ｅｘｔｒａｃｔ　蛋白Ｐｒｏｔｅｉｎ　ｌ２８×ｌ０。　１．２８×１０　１２８×１０。　１．２８×１００　１２８×１００　１．２８×１００　１２８×１００　ｌ２８×ｌ０。　１．２８×ｌ０。　１．２８×１００　１．２８×ｌ０。　１．２８×１００　１．２８×１００　１．１０×ｌ０。　０．９２×１０７　３．６４×１０。　３．６８×ｌ０。　３．７２×１００　３．６２×１００　３．４４×ｌ０　３．７２×１００　１．１２×ｌ０。　１．４×１０００　１．０８×１０’　０．５２×ｌ０６　１．４×ｌ０。０　Ｉ．１２×１００　多糖Ｐｏｌｙｓａｃｅｈａｒｉｄｅ　脂溶性物质Ｌｉｐｉｄ　总提取物Ｔ０ｔａｌ　ｅｘｔｒａｃｔ　蛋白Ｐｒｏｔｅｉｎ　多糖Ｐｏｌｙｓａｅｅｈａｒｉｄｅ　脂溶性物质Ｌｉｐｉｄ　３．８８×ｌ０。　３．３０×１０　０．７２Ｘ　１０６　维普资讯 http://www.cqvip.com

科学研究　食品研究与开发　２ｏｏ７．ＶｏＬ２８．Ｎｏ．ｏ６　６７　＝＝－Ｉ　力；而大肠杆菌只有大葱总提取物的浓度在３００　ｍ【几　时才有一点抑制，而且随浓度增加抑制程度不太大，由　此可见，大葱总提取液对大肠杆菌的抑制能力很弱；大　葱总提取物对枯草芽孢杆菌只有在浓度达到５００　ｍ【几　时才表现出抑制能力。　随着大葱蛋白提取物浓度的增加，各实验菌种的　数量并没有减少，这表明大葱蛋白成分对大肠杆菌、枯　草芽孢杆菌、白色葡萄球菌的抑制基本没有抑制作用。　萄球菌的抑制和大葱总提取物对它们的抑制比较相　似，而且抑制比较明显，因此，可以推测大葱对微生物　的抑制主要是以大葱中的脂溶性物质内的成分所作用　而成。近来对脂溶性物质的研究相对比较多　。现代研　究表明，葱属植物的化学成分主要有硫化物，甾体皂　苷、黄酮类化合物、含氮成分等。大葱制剂通过对巯基　的氧化，使与微生物生长繁殖有关的含巯基的酶失活，　或对含硫氧基的化合物如肌氨酸、谷氨酸产生竞争性　抑制，或非竞争性的抑制某些酶的技能，从而对多种致　病真菌起到抑制或杀灭作用。　２．２大葱各种提取物对真菌的抑制作用（见表２）　大葱的总提取液在５０　ｍ　Ｌ时，粘红酵母、黑曲霉　大葱多糖成分对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、白色葡　萄球菌也没有表现出抑制能力，因此大葱的多糖成分　不是抑制微生物的主要成分。　大葱脂类成分对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、白色葡　表２不同浓度的各种大葱提取物对真菌（ｃｆｕ／ｍＬ）的作用　Ｔａｂｌｅ　２　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｏｆ　ｗｅｌｓｈ　ｏｎｉｏｎ　ｔｈ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｆｕｎｇｉ　的菌落数就有所降低，随着大葱总提取液的浓度增加　粘红酵母、黑曲霉的菌落总数越来越少，而且降低的速　度非常快。大葱的蛋白和多糖提取物对粘红酵母和黑　曲霉均未表现出抑制作用，而大葱的脂类提取物对这　两种真菌的抑制作用则与大葱总提取物相类似。　３结论　取物类似；大葱的总提取物对粘红酵母和黑曲霉具有　一定抑制作用，大葱的脂溶性成分对真菌抑制作用与　总提取物相似。　参考文献：　［１】马钊，李景明，李丽梅，等．洋葱多糖提取工艺的研究［ＪＪ．食品工　业科技，２００５（５）：９８～９９　［２】刘岩，王海泉．大葱的食用与药用［Ｊ】．食品研究与开发，２００３（２）：　２４　大葱的总提取物对细菌中的白色葡萄球菌具有　抑制作用，对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的抑制能力较　差；大葱的蛋白成分和多糖成分对细菌和真菌没有抑　制作用；大葱的脂溶性成分对细菌的抑制作用与总提　［３　赵斌，何绍江微生物学实验【３１ＭＪ．北京：科学出版社．２００２：２５１　［４１陈向前＿中国蔬菜品种　Ｍ】．北京：中国农业科技出版社　收稿日期：２００６－１１－２９