洋葱中黄酮类化合物对结核分枝杆菌的抑菌作用研究

洋葱中黄酮类化合物对结核分枝杆菌的

*

抑菌作用研究

王丽丽①　石磊②　范大鹏①　李召东①

　　【摘要】　目的：探讨洋葱中黄酮类化合物对结核分枝杆菌的抑菌作用。方法：选用56株结核分枝杆菌临床分离株作为研究对象，结核分枝杆菌标准菌株（H37RV）为对照用菌株，通过分格平板琼脂比例法抑菌试验，观察不同浓度洋葱中黄酮类化合物、黄酮与一线抗结核药物联合使用对结核分枝杆菌的抑菌作用；小鼠腹腔巨噬细胞与结核分枝杆菌共同孵育后，将细胞分为对照组、560 μg/mL黄酮组、280 μg/mL黄酮组、140 μg/mL黄酮组、28 μg/mL黄酮组、异烟肼（INH）组，给予相应药物干预，通过实时荧光定量PCR法检测巨噬细胞吞噬的结核分枝杆菌DNA水平，通过酶联免疫吸附法检测细胞培养液中细胞因子水平。结果：（1）与2.0 μg/mL INH、1.0 μg/mL利福平（REP）、5.0 μg/mL乙胺丁醇（EMB）、2.0 μg/mL链霉素（SM）比较，28 μg/mL黄酮敏感率较低，560、280 μg/mL黄酮敏感率较高，差异有统计学意义（P<0.05）

，560、280 μg/mL黄酮敏感率比较差异无统计学意义（P>0.05）。 2.0 μg/mL INH、1.0 μg/mL REP、5.0 μg/mL EMB、2.0 μg/mL SM比较，各药物联合使用280 μg/mL 黄酮后敏感率均较高，差异有统计学意义（P<0.05）。（3）与INH组比较，280 μg/mL黄酮组、560 μg/mL黄酮组巨噬细胞吞噬的结核分枝杆菌DNA扩增Ct值较低及拷贝数较高，28 μg/mL黄酮组巨噬细胞吞噬的结核分枝杆菌DNA扩增Ct值较高及拷贝数较低，差异有统计学意义（P<0.05）。（4）与INH组比较，280 μg/mL黄酮组、560 μg/mL黄酮组细胞培养液中水平γ-干扰素、白细胞介素-1β水平较高，28 μg/mL黄酮组细胞培养液中水平γ-干扰素、白细胞介素-1β、白细胞介素-6水平较低，差异有统计学意义P<0.05）。结论：洋葱中黄酮类化合物对结核分枝杆菌有明显的体外抑菌作用，能够协同INH、REP、EMB及SM抑菌，还能促进巨噬细胞释放γ-干扰素、白细胞介素-1β等细胞因子，提高巨噬细胞吞噬结核分枝杆菌的能力，在≤280 μg/mL范围内，黄酮类化合物浓度越高作用越强。　　【关键词】　洋葱提取物；　黄酮类化合物；　结核分枝杆菌；　抑菌

　　Study on Inhibitory Effect of Flavonoids from Onion on Mycobacterium Tuberculosis/WANG Lili，SHI Lei，FAN Dapeng，et al. //Medical Innovation of China，2018，15（02）：037-042

　　【Abstract】　Objective：To analyze the inhibitory effect of Flavonoids from onion on Mycobacterium tuberculosis.Method：A total of 56 clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis were selected as the object and divided into blank control group，mycobacterium tuberculosis standard strain（H37RV） as control strain，through the agar plate agar method，the inhibitory effect of different concentrations of flavonoids，flavonoids combined with first-line anti tuberculosis drugs on Mycobacterium tuberculosis was observed； after co incubation of mouse peritoneal macrophages with Mycobacterium tuberculosis，the cells were divided into control group， 560 μg/mL flavone group，280 μg/mL flavone group，140 μg/mL flavone group，28 μg/mL flavone group and isonicotinylhydrazide（INH） group，received the corresponding drug intervention，DNA level of Mycobacterium tuberculosis in macrophages were detected by real-time fluorescent quantitative PCR，cytokine levels in cell culture medium were detected by ELISA.Result：（1）Compared with 2.0 μg/mL INH，1.0 μg/mL REP，5.0 μg/mL EMB，2.0 μg/mL SM，sensitive rate of 28 μg/mL flavonoids was lower，sensitive rate of 560 μg/mL flavonoids and 280 μg/mL flavonoids were higher，the difference was statistically significant（P<0.05），the sensitive rate in 560 μg/mL and 280 μg/mL flavonoids were not significantly different（P>0.05）.（2）Compared with 2.0 μg/mL INH，1.0 μg/mL REP，5.0 μg/mL EMB，2.0 μg/mL SM，the sensitivity rate of each drug combined with 280 μg/mL *基金项目：杭州市科委引导项目（2014YD12）①杭州市红十字会医院　浙江　杭州　310003②浙江省肿瘤医院通信作者：王丽丽

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（2）与（《中国医学创新》第15卷 第2期（总第428期）2018年1月基础研究 Jichuyanjiu　　

flavonoids were higher，the difference was statistically significant（P<0.05）.（3）Compared with INH group，the amplified DNA Ct value was lower and copy number of Mycobacterium tuberculosisengulfed by macrophage was higher in 280 μg/mL flavone group and 560 μg/mL flavone group，the amplified DNA Ct value was higher and copy number of Mycobacterium tuberculosisengulfed by macrophage was lower in 28 μg/mL flavone group，the difference was statistically significant（P<0.05）.（4）Compared with INH group，the levels of interferon-γ，interleukin-1βin cell culture medium were higher in 280 μg/mL flavone group and 560 μg/mL flavone group，the levels of interferon-γ，interleukin-1βin cell culture medium were lower in 28 μg/mL flavone group，the difference was statistically significant（P<0.05）.Conclusion：Flavonoids in onion has obvious antibacterial effect in vitro of Mycobacterium tuberculosis，able to cooperate with INH，REP，EMB and SM inhibiting Mycobacterium tuberculosis，also can promote macrophage release interferon-γ，interleukin-1βand other cytokines，increase the ability of macrophages to phagocytosis Mycobacterium tuberculosis，in≤280μg/mL range，the higher the concentration of flavonoids，the stronger the effect.

　　【Key words】　Onion extract；　Flavonoids；　Mycobacterium tuberculosis；　Bacteriostasis　　First-author’s address：Hangzhou Red Cross Hospital，Hangzhou 310003，China　　doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.02.009

　　结核分枝杆菌感染能够侵犯肺脏、胃、肝等各种器官，导致的结核病是当今人类主要慢性传染病之一[1]。近年来，结核病的发病率不断上升，资料显示，全球感染结核分枝杆菌的人口约占总人口1/3，新发病例约为800万/年，死亡率高达200万/年，我国活动性结核病患者约占全球发病的14.3%，给社会公共安全造成了很大威胁[2-3]。目前，结核病的治疗以异烟肼（isonicotinylhydrazide，INH）、利福平（rifampicin，REP）、乙胺丁醇（ethambutol，EMB）、链霉素（streptomycin，SM）一线抗结核药但是，作为结核病的病原菌，结核分枝杆菌具有多形性、抗酸性、生长缓慢、抵抗力强、变异性等生物学特性，很容易发生耐药问题，增加了临床治疗的困难[4-5]。耐药问题甚至增加了结核性脑膜炎等严重并发症的风险[6]。有研究显示，我国2012年多重耐药结核分枝杆菌感染的发病率在3.0%~5.9%[7]，这一数字正不断增加，且多重耐药结核分枝杆菌有发展为广泛耐药结核菌的可能，大大提高了结核病的治疗难度，因此寻找新的抗结核分枝杆菌药物已成为迫在眉睫的问题。我国应用中药治疗肺结核历史悠久且效果较好，洋葱为草本药食同源植物，具有抗菌、抗癌、抗氧化、抗血小板聚集等功效。洋葱对广泛耐药结核菌具有一定的抗菌活性，含有黄酮类化合物。黄酮类化合物被认为是潜在的抗结核药物[8]，但提取自洋葱的黄酮类化合物能否抑制结核分枝杆菌未见报道。本研究主要探讨洋葱中黄酮类化合物对结核分枝杆菌的抑菌作用，现报告如下。

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1　资料与方法1.1　材料

1.1.1　研究对象　56株结核分枝杆菌临床分离株来自本实验室；结核分枝杆菌标准菌株（H37RV）为对照用菌株，购自北京市结核与胸部肿瘤研究所；小鼠腹腔巨噬细胞，依照文献[9]方法提取自昆明小鼠。

1.1.2　药品与试剂　洋葱黄酮类化合物，采用乙醇回流提取法自新鲜洋葱中提取，并经大孔吸附树脂分离纯化获得；异烟肼（纯度>99.0%）、利福平（纯度>98.0%），美国Sigma公司产品；7H10琼脂、OADC营养液，购自美国BD公司；RPMI-1640培养基，购自上海博升生物科技有限公司；小鼠干扰素-γ（interferon-γ，IFN-γ）、白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）ELISA试剂盒，购自上海信裕生物科技有限公司；结核分枝杆菌基因（TB-SA）检测试剂盒（荧光定量PCR法），购自成都永安制药有限公司。

1.1.3　仪器　细胞培养板，上海朗晟生物科技有限公司产品；AHWS-150L恒温恒湿培养箱，常州爱华仪器制造有限公司；产品；3K15型离心机，德国Sigma公司产品；Freedom EVO 75全自动酶联免疫吸附分析仪，瑞士帝肯公司产品；AM5000实时荧光定量PCR检测系统，美国AmCell公司。1.2　方法

1.2.1　黄酮的分格平板琼脂比例法抑菌试验　（1）药物溶液配制：采用无菌生理盐水，分别配制浓度

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物为主，对于敏感菌，规范治疗可取得较好的疗效。（纯度>98.0%）、乙胺丁醇（纯度>98.5%）、链霉素

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为560、280、140、28 μg/mL黄酮溶液，INH（浓度0.2 μg/mL）、REP（浓度1.0 μg/mL）、EMB（浓度5.0 μg/mL）、SM（浓度2.0μg/mL）溶液。（2）培养基制备：7H10琼脂900 mL经高压后冷却至53 ℃左右，加入OADC营养液100 mL。混匀后置于分格板内，每格10 mL，并分别滴加1 mL药物溶液制成含不同浓度的黄酮平板、含INH平板、含REP平板、含EMB平板、含SM平板，对照培养管（不含药（TB-SA）检测试剂盒的操作步骤，加入结核分枝杆菌-DNA提取液用于裂解DNA，孵育30 min后13 000 r/min离心10 min，取上清液0.2 μL，置于 毛细反应管中，滴加17.8 μL反应液+0.2 μL Taq酶+0.03 μL尿嘧啶-N-糖基保护液，摇匀，置于AM5000实时荧光定量PCR检测系统进行DNA扩增，检测结核分枝杆菌DNA扩增Ct值及DNA拷贝数，拷贝数采用对数进行表示。

物的普通平板）滴加1 mL无菌生理盐水。（3）菌悬液配置：挑取在罗氏培养基上培养的结核分枝杆菌临床分离株和标准菌株菌落，利用无菌的0.5%吐温80生理盐水溶解稀释，与标准麦氏浊度比浊，配成1 mg/mL的悬液，采用无菌的0.5%吐温80生理盐水10倍比稀释，至接种浓度分别为10-2、10-4 mg/mL。0.01 mL菌液，分别接种到对照培养基及含药培养基表面，接种菌液尽可能分散于培养基上。（5）培养：将接种后的培养基置于37 ℃环境中，培养4周，待对照培养管的菌体生长良好后，进行菌体药物敏感性鉴定；若对照培养管菌体不生长，则需重新试验。（6）结果判读：37 ℃培养4周后观察计数培养基上菌落生长情况，并计算耐药百分比，耐药百分比=（含药培养基上菌落数/对照培养基上菌落数）×100%。耐药百分比≥0.1%为耐药，耐药百分比<1.0%为敏感[10]。

1.2.2　黄酮和抗结核药物协同抑菌试验　根据步骤1.2.1的试验结果，选取最适黄酮浓度，分别与0.2 μg/mL INH、1.0 μg/mL REP、5.0 μg/mL EMB、2.0 μg/mL SM溶液，配置成含黄酮及一线抗结核药物的平板，按照步骤1.2.1的操作检测各药物的耐药百分比。

1.2.3　细胞培养　将小鼠腹腔巨噬细胞浓度调整为1×109/L，接种于48孔板中，500 μL/孔，并分别加入500 μL RPMI-1640培养基（含100 mL/LFBS）及500 μL密度为1×1010

/L的H37RV菌株；将细胞分为对照组、不同浓度黄酮组及INH组，对照组加入100 μL无菌生理盐水，黄酮组分别加入560、280、140、28 μg/mL黄酮溶液100 μL，INH组加入0.2 μg/mL INH溶液100 μL，每组6个培养孔；置于37 ℃、5%CO2的培养箱培养5 h。

1.2.4　结核分枝杆菌-DNA水平检测　采用RPMI-1640培养基对培养的细胞进行洗涤，清除游离结核分枝杆菌，严格按照结核分枝杆菌基因

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1.2.5　细胞培养液中细胞因子水平测定　收集细胞培养上清液，采用Freedom EVO 75全自动酶联免疫吸附分析仪，采用酶联免疫吸附法（ELISA），严格按照试剂盒步骤进行操作，检测细胞培养液中IFN-γ、IL-1β水平。

1.3　统计学处理　所有统计数据均统一整理，采用

SPSS 17.0软件包分析，符合正态性的计量资料采用（-x±s）表示，结核分枝杆菌对各种药物的敏感率采

用百分率（%）表示，予以RxC 字2检验，各组巨噬细胞吞噬的结核分枝杆菌DNA扩增Ct值及拷贝数、细胞培养液中IFN-γ、IL-1β、IL-6水平对比予以独立样本t检验。以P<0.05为差异有统计学意义。2　结果

2.1　结核分枝杆菌对不同浓度黄酮敏感率比较　一线抗结核药物2 μg/mL INH、1.0 μg/mL REP、5.0 μg/mL EMB、2.0 μg/mL SM之间敏感率比较，差异均无统计学意义（P>0.05）；与一线抗结核药物2 μg/mL INH、1.0 μg/mL REP、5.0 μg/mL EMB、2.0 μg/mL SM比较，28 μg/mL黄酮敏感率明显较低，560 μg/mL、280 μg/mL黄酮敏感率明显较高，差异均有统计学意义（P<0.05）；560 μg/mL黄酮及280 μg/mL黄酮敏感率比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

表1　结核分枝杆菌对不同浓度黄酮敏感率比较药物平板样本量敏感率（感染数）

P值（株）%（株）（*P/#P/△P）0.2 μg/mL INH5637.500（21）#△0.026/0.031.0 μg/mL REP5646.428（26）#0.0555.0 μg/mL EMB5653.571（30）#0.0512.0 μg/mL SM5648.214（27）#△0.053/0.001560 μg/mL黄酮5691.071（51）*#0.002/0.001280 μg/mL黄酮5685.714（48）*#0.003/0.002140 μg/mL黄酮5648.214（27）#△0.053/0.00428 μg/mL黄酮

56

19.642（11）*△

0.750/0.068

　　*为与0.2 μg/mL INH比较；#为与28 μg/mL黄酮比较；△为与280 μg/mL黄酮比较

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（4）接种：采用标准接种环分别取 《中国医学创新》第15卷 第2期（总第428期）2018年1月基础研究 Jichuyanjiu　　

2.2　结核分枝杆菌对黄酮和抗结核药物协同用药敏感率比较　0.2 μg/mL INH联合280 μg/mL黄酮的敏感率明显高于0.2 μg/mL INH，差异有统计学意义（P<0.05）；1.0 μg/mL REP联合280 μg/mL黄酮的敏感率明显高于1.0 μg/mL REP，差异有统计学意义（P<0.05）；5.0 μg/mL EMB联合280 μg/mL黄酮的敏感率明显高于5.0 μg/mL EMB，差异有统计学意义（P<0.05）；2.0 μg/mL SM联合280 μg/mL黄酮的敏感率明显高于2.0 μg/mL SM，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

表2　结核分枝杆菌对黄酮和抗结核药物协同用药敏感率比较

药物平板0.2 μg/mL INH

280 μg/mL黄酮+0.2 μg/mL INH

1.0 μg/mL REP

280 μg/mL黄酮+1.0 μg/mL REP

5.0 μg/mL EMB

280 μg/mL黄酮+5.0 μg/mL EMB

2.0 μg/mL SM

280 μg/mL黄酮+2.0 μg/mL SM

样本量（株）5656565656565656

敏感率（感染数） %（株）

37.500（21）89.285（50）a46.428（26）82.142（46）b53.571（30）78.571（44）c48.214（27）92.857（52）d

拷贝数比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。见表3和图1。

表3　各组巨噬细胞吞噬的结核分枝杆菌DNA扩增Ct值及拷贝数

比较（-x±s）

组别对照组（n=6）INH组（n=6）

Ct值28.841±0.86024.012±0.590*

DNA拷贝数 3.972±0.210 8.090±0.540* 4.132±0.250#△ 7.841±0.490*10.741±0.690*#△11.352±0.72*#△

28 μg/mL黄酮组（n=6）27.962±0.810#△140 μg/mL黄酮组（n=6）24.691±0.730*280 μg/mL黄酮组（n=6）21.431±0.480*#△560 μg/mL黄酮组（n=6）21.841±0.5*#△140 μg/mL黄酮组比较，P<0.05。

　　*与对照组比较，P<0.05；#与INH组比较，P<0.05；△与

　　a与0.2 μg/mL INH比较，P=0.025<0.05；b与1.0 μg/mL REP比较，P=0.031<0.05；c与5.0 μg/mL EMB比较，P=0.042<0.05；d与 2.0 μg/mL SM比较，P=0.029<0.05。

图1　结核分枝杆菌-DNA扩增水平实时PCR检测实时曲线图

2.3　各组巨噬细胞吞噬的结核分枝杆菌DNA扩增Ct值及拷贝数比较　与对照组比较，INH组、140 μg/mL黄酮组、280 μg/mL黄酮组、560 μg/mL黄酮组巨噬细胞吞噬的结核分枝杆菌DNA扩增Ct值较低及拷贝数较高，差异有统计学意义（P<0.05）；与INH组比较，280 μg/mL黄酮组、560 μg/mL黄酮组巨噬细胞吞噬的结核分枝杆菌DNA扩增Ct值较低及拷贝数较高，28 μg/mL黄酮组巨噬细胞吞噬的结核分枝杆菌DNA扩增Ct值较高及拷贝数较低，差异有统计学意义（P<0.05），140 μg/mL黄酮组巨噬细胞吞噬的结核分枝杆菌DNA扩增Ct值及

组别对照组（n=6）INH组（n=6）28 μg/mL黄酮组（n=6）140 μg/mL黄酮组（n=6）280 μg/mL黄酮组（n=6）560 μg/mL黄酮组（n=6）

γ-干扰素11.951±1.3243.312±5.220*12.53±1.160#△39.571±4.930*69.780±6.260*#△71.112±6.040*#△

2.4　各组细胞培养液中IFN-γ、IL-1β水平比较　与对照组比较，INH组、140μg/mL黄酮组、280 μg/mL黄酮组、560 μg/mL黄酮组细胞培养液中水平IFN-γ、IL-1β水平较高，差异均有统计学意义（P<0.05）；与INH组比较，280 μg/mL黄酮组、560 μg/mL黄酮组细胞培养液中IFN-γ、IL-1β水平均较高，28 μg/mL黄酮组细胞培养液中IFN-γ、IL-1β水平较低，差异均有统计学意义（P<0.05），140 μg/mL黄酮组细胞培养液中IFN-γ、IL-1β水平差异无统计学意义（P>0.05）。见表4。

表4　各组细胞培养液中IFN-γ、IL-1β水平比较[μg/μL，（-x±s）]

P值（*P/#P/△P）

白细胞介素-1β7.373±0.84

0.0450.055/0.0460.0470.025/0.047/0.0430.021/0.035/0.042

27.832±2.03*8.280±0.93#△26.431±2.15*37.982±3.25*#△39.773±3.56*#△

0.0040.070/0.0040.00370.032/0.048/0.0460.023/0.045/0.044P值（*P/#P/△P）

　　*与对照组比较，P<0.05；#与INH组比较，P<0.05；△与140 μg/mL黄酮组比较，P<0.05。

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3　讨论

　　近年来，由于抗结核治疗不规范、人类免疫缺陷病毒（HIV）感染患者增多、人口老龄化、环境污染等原因[11]，导致耐药结核菌株流行，引起结核病疫情重新蔓延，威胁全球公共卫生安全。对于耐药结核菌株，INH、REP、EMB、SM等药物疗效不理想，且此类药物长期使用毒副作用较大，亟需研制新的抗结核分枝杆菌药物来控制结核病发展。我有结核分枝杆菌的受体，是结核分枝杆菌最主要的宿主细胞。巨噬细胞能够识别、吞噬结核杆菌，通过细胞凋亡来将其清除，巨噬细胞的吞噬功能能够反映其清除结核分枝杆菌的能力。巨噬细胞还能够释放IFN-γ、IL-1β等多种细胞因子。有研究显示，IFN-γ、IL-1β对于激活巨噬细胞，提高巨噬细胞的吞噬能力有重要作用。白细胞介素2受体在不同年龄肺结核患者中动态变化能预测结核治疗国中药资源丰富，许多中药或中药成分对结核分枝杆菌有良好的抑制作用[12-13]，也是结核病新药研发的主要来源之一。洋葱是常见中药，具有发散风寒、解毒杀虫等功效，药理研究显示，洋葱中含有含硫化合物、类黄酮、苯丙素酚类、甾体皂甙类化合物等，具有抑菌、抗癌、降糖降脂等作用[14]。但是，洋葱中何种成分发挥抑菌作用目前尚不明确，有研究显示，中药黄芩的黄酮类成分之一黄芩苷对结核分枝杆菌具有体外抑菌作用[15]，提示黄酮类化合物具有一定抗菌活性。故本次通过对洋葱中黄酮类化合物对结核分枝杆菌的抑菌作用进行研究，来为临床治疗结核病提供新的思路和方向。

　　本次研究选择临床分离的结核分枝杆菌进行研究，其中包括MDR-TB、XDR-TB以及敏感的结核分枝杆菌，对照菌选择H37RV菌株，分别接种于含有560、280、140、28 μg/mL黄酮，0.2 μg/mL INH、1.0 μg/mL REP、5.0 μg/mL EMB、2.0 μg/mL SM的分格平板上，观察各平板上菌落的生长情况。结果显示，与0.2 μg/mL INH、1.0 μg/mL REP、 5.0 μg/mL EMB、2.0 μg/mL SM比较，28 μg/mL黄酮敏感率较低，560、280 μg/mL黄酮敏感率较高P<0.05），560、280μg/mL黄酮敏感率差异无统计学意义（P>0.05）。药物敏感率是由菌落的生长情况计算而得的，能够反映药物的抑菌能力，结果表明，黄酮浓度在28 μg/mL时抑菌效果较差，140 μg/mL抑菌效果与一线抗结核药物相当，随着药物浓度增加抑菌能力加强，浓度达280、560 μg/mL时，抑菌能力最强且两者之间差异不大，可以认为洋葱中黄酮类化合物具有较好的抑制结核分枝杆菌作用，且280μg/mL为黄酮最适抑菌浓度；将280 μg/mL黄酮与INH、REP、EMB、SM分别联合制成含药平板，再次进行药敏试验，结果显示联合黄酮后各药物的敏感性明显增加，表明280 μg/mL黄酮能够提高结核分枝杆菌对于INH、REP、EMB、SM的敏感性，降低耐药程度。

　　结核分枝杆菌属于胞内致病菌，巨噬细胞表面

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效果[16]。故本次将巨噬细胞与结核分枝杆菌共同培养，并采用不同药物进行干预，之后通过实时荧光定量PCR法检测巨噬细胞吞噬的结核分枝杆菌DNA水平，同时检测细胞培养液中IFN-γ、IL-1β水平，结果显示，与INH组比较，280 μg/mL黄酮组、 560 μg/mL黄酮组巨噬细胞吞噬的结核分枝杆菌DNA扩增Ct值较低及拷贝数较高、细胞培养液中水平IFN-γ、IL-1β水平较高，28 μg/mL黄酮组巨噬细胞吞噬的结核分枝杆菌DNA扩增Ct值较高及拷贝数较低、细胞培养液中水平IFN-γ、IL-1β水平较低（P<0.05），表明280、560 μg/mL黄酮不仅具有抑制结核分枝杆菌作用，还能促进巨噬细胞释放IFN-γ、IL-1β等细胞因子，提高巨噬细胞的吞噬能力，从而防治结核病的发生。

　　本实验发现洋葱中黄酮类化合物对结核分枝杆菌有明显的体外抑菌作用，能够协同INH、REP、EMB及SM抑菌，还能促进巨噬细胞释放IFN-γ、IL-1β等细胞因子，提高巨噬细胞吞噬结核分枝杆菌的能力，在≥280 μg/mL范围内，黄酮类化合物浓度越高作用越强。

参考文献

[1]白雪娟，吴雪琼.结核分枝杆菌潜伏感染相关抗原的研究进展[J].中国防痨杂志，2014，36（3）：204-210.

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（《中国医学创新》第15卷 第2期（总第428期）2018年1月基础研究 Jichuyanjiu　　

茴香提取液对酒精中毒小鼠的解酒

*

及脑组织抗氧化作用的研究

韩光顺①　梁华益①　焦雯①　赵越②　俞皋①　柯春娇①　黄丽娟①　方晓燕①

　　【摘要】　目的：探究茴香提取液对酒精中毒小鼠的解酒及脑组织抗氧化的作用。方法：采用56度白酒按0.15 mL/10 g体重给予一次性灌胃法建立小鼠醉酒模型，取50只小鼠，每组10只为清醉解酒药组、模型组、茴香低剂量组、茴香中剂量组和茴香高剂量组，以茴香高、中、低三种剂量分别进行预防性干预和治疗性干预，分别观察茴香对小鼠醉酒时间和醒酒时间的影响；另取50只小鼠，按体重随机分为正常组、模型组、茴香低剂量组、茴香中剂量组和茴香高剂量组，每组10只，除正常组外，各组采用56度白酒按0.13 mL/（10 g·d）体重灌胃，并给予相应的药物干预，30 d后，取脑组织匀浆，测脑组织谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）的活性。结果：与正常组相比，模型组脑指数、MDA水平明显升高，SOD活性、GSH含量均明显降低（P<0.01）；与模型组相比，茴香中、高剂量组MDA水平明显降低，茴香高剂量组脑指数、SOD活性、GSH水平均明显升高（P<0.05或0.01）；在预防醉酒实验中茴香高剂量组和清醉解酒药组醉酒时间明显延长，醒酒时间明显缩短，在治疗醉酒实验中茴香高剂量组和清醉解酒药组醒酒时间均明显缩短（P<0.05或0.01）。结论：茴香提取液具有一定的解酒促醒作用及降低酒精中毒小鼠脑组织氧化应激损伤。　　【关键词】　茴香；　酒精中毒；　脑组织；　氧化应激；　小鼠

　　Effect of Fennel on Sober-up and Anti-oxidation of Brain Tissue in Alcoholism Mice/HAN Guangshun，LIANG Huayi，JIAO Wen，et al.//Medical Innovation of China，2018，15（02）：042-045

　　【Abstract】　Objective：To explore the effect of Fennel on sober-up and anti-oxidation of brain tissue in alcoholism mice.Method：The mice model of drunkenness were established with 56° alcohol were single gavaged according to 0.15 mL/10 g.50 mice were divided into the Qingzui drug group，the model group，the high-dose Fennel group，the medium-dose Fennel group，the low-dose Fennel group according to the weight of 50 mice，preventive intervention and therapeutic intervention were taken in high，medium and low three doses，respectively observed the effect of Fennel on drunkenness and sober-up time.Another 50 mice were divided into the normal *基金项目：2017年广西壮族自治区级大学生创新创业训练计划立项项目（201710599037）

①右江民族医学院　广西　百色　533000②重庆医科大学基础医学院通信作者：黄丽娟

485-508.

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（收稿日期：2017-10-11）（本文编辑：程旭然）

Medical Innovation of China Vol.15, No.2 January,2018

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