应用PCR对病毒性心肌炎小鼠进行病原学诊断及其相关因素的研究

中国厂矿医学２００２年第】５卷第２期　９１　应用ＰＣＲ对病毒性心肌炎小鼠进行病原学诊断及其相关因素的研究　葛明马沛然‘　王伟　王立琴王莉　李丽文（济南铁路中心医院济南市２５０００１）　摘要　目的：研究用聚合酶链反应（Ｉ】（＝＝Ｒ）技术测定病毒性心肌麦小鼠Ｃｏｘ．ｓａｃｋｉｅ　Ｖｉｒｕｓ　１３３　ＲＮＡ（ＣＶＢ—ＲＮＡ）对病毒性心肌　斑病毒病脒的敏感性和可靠性。办法：对７５　Ｈ小鼠腹腔注射ＣｖＢ３病毒后，做心肌病理检查和艋验血｝疰中Ｏ．ｑ３一ＲＮＡ　结果：　７５只小鼠病理检查结果有心肌麦改变占８５　３％，（　３一ＲＮＡ阳性牢为５３　３％；Ｃ３．ｑ３一ＲＮＡ用性卑２周以内显著高于２周以　后。特论：用Ｐ（　技术橙捌病毒性心肌走血中ＣＶＢ—ＲＮＡ的敏感性与可靠性均较高．适用于病毒性心肌盎早期诊断。　关键词心肌炎柯萨奇病毒ＰＣＲ技术小鼠　中图分类号：Ｒ５４２．２　Ｉ文献标识码：Ａ文章编号１００４—７９５６（２００２）０２—００９２—０２　Ｓｌｕｄｙ　Ｏｎ　Ｅｔ　ｌ呷ｊｃ　Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ａｎｄ　Ｉｂ　Ｒｅ］ａｔｅｄ　Ｆａｃｔｏｒｓ　ｉｎ　Ｍｉ艘ｗｉｔｈ　Ｖｉｍｌ　Ｍｙｏｃａｒｄｉｔｉｓ　ｂｖ　ＰＣＲ　Ｇｅ　ｍｉｎｇ，Ｍａ　Ｐｅｉｒ￣，Ｗａｎｇ　Ｗｄ．ｅｒ　ａＩ　ＪＩｒｍｎ　Ｒａｉｌｗａｙ　Ｃｃｒｔｔｒ￣ｌ　Ｈｒ￣ｐｉｔａ］Ｉ１ｉｎａｎ　２５０００１　ａｂｓｌｒａＣｔ　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｒｅａｌｉｚｅ　ｔｈｅ　ｓｅ￣ｓｉｔＩｑ　ａｎｄ　ｔｅｌｉａｂｉｌｉｔｙ。ｆ　ＣＶＢ—ＲＮＡ　ａ．￣ｓａｙ　ｉｎ　ｂｌｏｏｄ　ｂｙ　ＰＣＲ　ｔｅｃｌｍｉｑｕｅ　ｔｏ￣ｅｎｔｉｆｙ　ｖｉｒａｌ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　０ｆ　ｍｙｏｅ￣ｄｉｔｉｓ　Ｍｅｔｈｏｄ：ＣｖＢ１　ｉｎｊｅｃｔｅｄ　ｉｎｔｏ　ｔｈｅ　ａｂｄｏｍｉｎａＩ　ｃａ￣４ｔｙ　ｄ　７５　ｎｆｉｃｅ　Ｔｈｅｎ　ｐａｔｈｏＬ￣Ｉｉｃａｌ　ｅｘ￣ｒｆｌ　ａｎｄ　ＣＶＢ—ＲＮＡ　ｙ　ｂｙ　ＩＫ！Ｒ　ｍｅｌｍｉｑｕｅ㈣ｄｏｎｅ　Ｒｅｓｕｌｔ：６４　ｄ　７５　ｍｉｃｅ｛８５　３％）ｈａｄ　ｐａｔｈｏｔｑｇｉｃａｌ　ｃｈａｎｇｅ∞ｍｙｏｃａｒｄｉｔｉｓ　ＣＶＢ—ＲＮＡ　ｉｎ　￣ｔｉｖｅ　ｉｎ　４０　７５　ｍｉｃｅ｛５３　３０，６）Ｔｂｅ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｍｔｅ　０ｆ（３．ｑ３一ＲＮＡ　ｉｎ　ｍｙｏｃａｒｄｌｔｉｓ　ｗｅｒｅ　ｃ０旷ｎ日　｝　０　Ｏ０ｕ］２￣ｅ　ｗｉｃｈ｜ｎ　ｔｗｏ　ｗｅｅｋ　ａｎｄ　ｎⅢｔ】１ａｎ　ｔｗｏ￣，ｅｅｋ　Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ｒｅｌｉａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ＣＶＢ—ＲＮＡ　ａｓｓａｙ　ｉｎ　ｂｌｏａｄ　ｂｙ　ＰＣＲ　ｔｅｃｈｎ￣ｅ　ｔｏ　ｉｄｅｎｔｉｆｙ　ｖｉｒａｌ　ｐａｔｂｏｇｅｎ　０Ｉ　ｍｙｏｃａｒｄｉｔｉｓ　Ｔｈｅ　ｍｅｄｏ：ｌ　ｏｆ㈣ｓ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｆｏｒ　ｅａｚ］ｙ　ｓｔａｇｅ　ｏｆ　ＶＭ　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ　Ｍ｝￣ａｒｄｉｔｉｓ　ＣＶＢ　ＰＣＲ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　Ｍｉｃｅ　确定心肌炎的病毒病原埘病毒性心肌炎（ＶＭ）的诊断　与治疗有重要意义。通过心肌炎活检（ＥＭＢ）取得心肌话　感染ｌ４天以内４５只．ｃＶＢ＝ｌ　ＲＮＡ阳性３１只．阳性率为　６８．９％。２周以后到４周３０只阳性率为３０％。ＣＶ岛阳性　率感染后２周内显著高于２－－４周（　＝１０．９４　Ｐ＜０　０ｓ）。　表２　ＰＣＲＣＶＢ－ＲＮＡ两组结果比较　乖检测病毒病原临床上很困难。自１９９０年Ｓｔｅｖｅｎ报告用　多聚酶联反应（ＰｃＲ）检测心肌炎患儿血液中柯萨奇病毒Ｂ　组ＲＮＡ（Ｃ￣ｖｑ３一ＲＮＡ）取得成功以来．困其简单易行，迅即　在国内外广泛应用。但用ＰＣＲ测定血液中ＣＢｖ—ＲＮＡ的　敏感性和可靠性，国内外还缺少研究，为此，我们通过动物　实验对上述问题进行研究。　Ｉ材料和方法　Ｉ　１动物来源：４～６周龄健康雄性Ｂａｌ　ｂ／ｃ小鼠，由山东　医科大学动物实验中心提供：　】．２病毒：由山东省医科院提供Ｃｖ　Ｎａｎａｙ株：　】．３小鼠ＶＭ模型制作：Ｂａｌｂ／ｃ，Ｊ、鼠７５只腹腔注射】０　ＴＣＩｒ］５０　ｕｌ的ＣＶＢ３液０　１２ｍ１．对照组２５只腹腔注射等量　生理盐水。　２　３病理检查与血中ＣｖＢ—ＲＮＡ阳性对比：见袁３。　表３病理与ＣＶＢ—ＲＮＡ结果对比　】４柠查指标：病毒感染后分别于７、ｌ０、】４、２】、２８天杀　死，感染组ｌ５只小鼠，对照组５只小鼠，摘眼球取血，用　ＰＣＲ法检测ｃ￣，ｑ３一ＲＮＡ，同时取心脏作病理（光镜与电镜）　检查。Ｐ（Ｒ试验盒由北京微生物工程技术公司提供。　２结果　袁３中符合】９８４年Ｄ　ｌａｓ　ＶＭ病理诊断标准的为　８５．３％．显著高于ＣＶＢ—ＲＮＡ阳性率（５３．３％）．两者相比　Ｉ８　０６．Ｐ＜０．０５。病理检查ＶＭ阳性６４倒中ＣＶＢ—　２．１电镜与光镜检查结果：见表ｌ。心肌炎诊断标准依据　１９８４　Ｄａｌｌａｓ　ＶＭ病理诊断标准。　袁ｌ动物模型的病理检查结果　ＲＮＡ阳性４０例．阴性２４侧；病理检查胡性ｌｌ例中ＣＶＢ—　ＲＮＡ均为阴性。可见ＣＶ　ＲＮＡ无假阳性，特异性高．但　有假阴性。　３讨论　心肌炎患儿自　ＩＬ＂肌标本中分离出病毒是最可靠的病毒　性心肌炎诊断依据，但心肌标本很难获得．且阳性率不高。　２０世纪８０年代以来由于分子技术的发展，为心肌炎患者　的病毒病原诊断提供了新的方法，如原位斑点杂交法，敏感　性与特异性均很高，但只能用于检查心肌标本，临床上使用　２．２　ＰＣＲＣＶＢ：，ＲＮＡ检查结果：见表２。ＰＣＲ检查ＣＶＢ—　ＲＮＡ，实验组显著高于对照组（　＝１６　８８　Ｐ＜０　０５）　小鼠　仍很困难。ｌ９９０年ｊｉｎ报告从心肌标本中用ＰＣＲ方法测　定肠道病毒ＲＮＡ取得成功…。１９９０年Ｓｔｅｖｅｎ（２］、１９９３年　山东省立医院　山东省妇幼保证院　维普资讯 http://www.cqvip.com

中凰厂矿医学２００２年第ｌ５卷第２期　叶鸿瑁¨Ｊ、　９９４年柯碧艘　分别报告用ｆ　ＣＲ技术自心肌　ＣＶＢＲＮＡ阳性率２周以内显著高于２周以后　因此，用　炎血液标本中检查出（＝ｖＢ—ＲＮＡ　由于从血液标本易于　ＰＣＲ技术羽Ｉ定ｖ－Ⅵ的病毒病原适用于ｖＭ早期。　取得，ＰＣＲ方法又较简便，因此此项检查方法很快在心肌　参考文献　炎患者中广泛应用，但对此方法的敏感性和可靠性还缺少　［１］Ｊｉｎ　Ｏ，Ｓｉｄｅ　ＳＭ，Ｂｕｔａｎｙ　ｊｗ，ｅｃ　ａｌ　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅＮｔｅｒｏｖｉ　ｎＩｓ　ＲＮＡ　研究。　ｉｎ　ｍｙＤｃａｒｄ　ｂｌｏｐ　ｆｍｍ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｍｙ￣ａｒｄｉｔｉｓ　ａｎｄ　我们通过动物试验，对７５只小鼠腹腔注射Ｃｒｉｂ，病毒　ｅａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ　ｕｓｉｎｇ　ｇｅｎｅ　ａｍｐｌｉｆｌｃａｔｌｏｎ＇ｏｙ　ｐｏｌｙｍｅｒ￣ｅ　ｃｈａｉｎ　以后，２８天以内系死后病理检查有心肌炎６４只，血液中用　Ｔｅａｃｔ１∞Ｃｉｒｅ山　Ｉｕｎ，１９９Ｏ，８２（】）：８　ＰｃＲ方法检出ＣｖＢ—ＲＮＡ共４Ｏ只，此４Ｏ只小鼠病理变化　【２　Ｊ　Ｓｔｅｖｅｎ　Ｔ，Ｖａｌｋｅｒ　Ｗ，Ｂｒａｃｅ　Ｍ，ｅｔ　ａｌ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ａｐｐｒｏａｃｈ　ｔｏ　都符合心肌炎诊断标准，而ｌ１只病理检查阴性小鼠用ＰＣＲ　￣ｍｔｅｒｏｖｉｒａｌ　ｄｉａｇｎｍｉｓ　ｉｎ　ｃａｄｉｏｍｙｕｐａｔｈｙ　ａｎｄ　ｍｙｏｃａｒｃｌｉｒｉｓ　Ｊ　Ａｍ　ＣｏｉｌＣａｒｄｉｏｌ，１９９０，１５：１６８８　法检测ＣｖＨ—ＲＮＡ均为阴性，ＰＣＲ检测ＣｖＢ—ＲＮＡ特异　［３］叶鸿瑁，柯小玲，尹智明，等应用聚合酶链反应技术对肠道　性为１００％；但有２４只病理符合心肌炎，而血中未检出　病毒心肌炎进行病原学诊断的探讨　中华儿科杂志，１９９３．　ＣＶＢ—ＲＮＡ，其敏感性为６２　５％。可见用ＰｃＲ技术检测　３ｌｃ６）：３２９　ＶＭ病毒病原特异眭裉高，敏感性也较高。　［４］柯碧波，吴秉链，官恩聪，等心肌炎及扩张型心肌病中人类　动物试验显示，小鼠感染ＣｖＢ　后用ＰＣＲ检测血液中　小ＲＮＡ病毒检测的研究中华儿科杂志，１９９，１　３２＇（３）：】４４　导管射频消融治疗心律失常５５例体会　周双陆成功颤昌福　罗赤峰杨桂枝谢其利　（攀钢．巷医院心内科攀枝花市６１７０２３）　摘要　目的：介绍导管射频消融治疗心律失常的初步体会　方法：对房室结双径路伴房室结折返性心动过速（ＡｖＮＩ订），选　择｛肖融慢径，耐房室旁路拌房室折返性心动过速（ＡＶＲＴｊ，采用常规方法标酬和消融旁遭，对室速和室早均采用寻找心内膜最早　激动点与起搏标测相结台。能量均ｎ　１０Ｗ开始。结果：５３侧消融成功，２例右侧旁路消融生败；并发Ｉ　ＡＶＢ　３例，完全性左束　支阻滞１倒，急性心包填塞２蜘ｌ。结论：为藏少并发症，开展导管射频梢融治疗心律生常，应做到导管操怍轻秉，太头电扳位置难　以确定时应采用多角度透视，冠状窦电极不宜过替，靶点圈不带Ｈ被，从低能量开始　严密监测阻抗。　关键词导管消融射频电流心律失常　中图分类号：Ｒ５４１　７文献标识码：Ａ文章编号：１００４—７９５６ｆ２００２）０２—００９２—０２　自１９９６年以来，我们共开展导管射频消融（ＲＩ℃Ａ）治　道１ｌ例，显性旁道４例，左后问隔臆匿性旁道２例；右侧游　疗心律失常５５例，现报道如下。　离壁显性旁道３例，右后间隔显性旁道ｌ倒。左侧旁道ｌ７　ｌ资料与方法　例均消融成功，有ｌ例复发，第２次消融成功：并发Ｉ　ＡＶＢ　ｌ　ｌ临床资料５５侧均为住院患者，男２ｌ例．女３４例。　ｌ例，完全性左束支阻滞（ＣＬＢＢＢ）ｌ例，ｌ例在成功消融旁　年龄２２－－６２岁　房室结双径路伴房室结折返性心动过速　道后拔出冠状窦电极时出现急性心包填塞，紧急穿刺后恢　（ＡＶＮＲＴ）２６例，房室旁路伴房室折返性心动过速（ＡＶＲＴ）　复。右侧旁道仅２例消融成功，另２倒消融失败。ｌ例左　２ｌ例，左室特发性室建ｌ例，致心律失常型右室发育不良　室特发性室速消融成功，ｌ例ＡＲＶＤ室速消融失败。　（ＡＲＶＤ）室速１例．呈二、三联律的右室流出道（ＲＶＯｒ）室　ＲＶＯＴ室早６例消融成功，但并发急性心包填塞ｌ例，紧急　早６例。　穿刺引流后第２天恢复。　１．２方法对ＡｖＮＲＴ，在希氏束下方与冠状窦口之间选　３讨论　择消融慢径…，并采用通用标准判断疗效　。对ＡＶＲＴ，　ＲＦＣＡ冶疗快速性　Ｃ－律失常已经取得了很大进展，尤　采用常规方法标测和消融旁道，判断疗教，并确定旁路的解　其是对于阵发性室上速和特发性室速。对ＡＶＮＲＴ。ｇｔ前　剖位置“　Ｊ。对阵发性室速在诱发心动过速后。寻找心内　多采用选择消融慢径的方法，以减少完全性房室传导阻滞　膜最早激动点，井结合起搏标测的结果，确定放电部位。对　这一严重并发症。本文２６例慢径成功消融部位从希氏束　ＲＶ０Ｔ室早寻找早搏状态下提前的心室激动点，起搏找与　下方到冠状窦口附近这一相当广泛的范围，少数病倒在较　室早完全相同的图形。室速消融成功标志为：（１）放电过程　大范围内均可出现交界性心律。为了避免房室传导阻滞的　中室速消失；（２）不能诱发出原心动过速。ＲＶＯＴ室早消融　发生，我们认为无论消融靶点是否在常规位置，均宜采用　成功标志为：放电后呈二、三联律的室早在ｌ０秒钟内消失，　“滴定法　消融，即从１０Ｗ、数秒开始，观察ＡＶ间期无变化　观察１小时，窦性心律稳定，无与临床室早形态相同的室　时，再逐渐增加功率和延长消融时问。直至消融成功。　早。我们均从小能量（１ｏｗ）放电开始，根据放电时的反应，　左侧旁路采用经股动脉逆行途径插人大头电极导管的　逐步增加能量。　方法很容易到游离壁的前倒壁和侧壁，由于电摄稳定，接触　２结果　压力太，消融成功率高。本文ｌ７例均消融成功。但并发Ｉ。　ＡＶＮＲＴ　２６例均为慢快型，均选择慢径消融成功，２倒　ＡＶＢ及ＣＬＢＢＢ各１倒。造成并发症的原因是因为消融左　并发Ｉ。ＡＶ　慢径消融成功部位：（１）希氏束下方ｌ３例；　后间隔旁路时太头导管过度旋转而离开二尖瓣环钩挂于主　（２）冠状窦口附近７例；（３）Ｋ０ＣＨ三角中份，即希氏束与冠　动脉瓣下，消融到左中间隔。为减少左侧旁道消融时房室　状窦口之间６例。ＡＶＲＴ　２１倒，其中左侧游离壁隐匿性旁　传导阻滞及室内阻滞的发生，我们认为：（１）左后侧壁或左　．