万初筒者麟摺色麟恢参颇秘级真应屠韶卒著娜反相高效液相色谱的基本原理及其应用刘桂洋上海大学化境与化学工程学院上海’毛香菊陈晋阳武汉大学化学与分子科学学院湖北武汉摘要高效液相色谱经过年的发展在色谱理论研究仪器研究水平分析实践应用等方面已经取得长足的进步本文主要介绍了反相高效液相色谱的基本原理和特点工程中的应用以及影响因素并对其在生物化学和生物在环境监测中的应用在精细有机合成中的应用进行了举例关键词反相高效液相色谱保留值液相色谱的应用十中圈分类法文献标识码前言反相高效液相色谱简介更广泛反相键合相色谱法的分离原理闪”随着高效液相色谱的快速发展各种新的色谱技术不断涌现其中反相高效液相色谱因其良好在反相键合相色谱法中使用的是非极性键合固定相它是将全多孔或薄壳微粒硅胶载体的选择性应用的范围不断扩大显示出很好的应用前景卜经酸活化处理后与含轻基链、或苯基的硅烷化试剂反应生成表面具有烷基或苯基的非极性固定相如共价结合到载体上的直链碳氢化合反相高效液相色谱是化学键合相色谱法的一种化学键合相色谱法是由液液色谱法发展起来物正辛基等的是为了解决在分离过程中机械吸附在载体上的固体液的流失问题而发展出来的一种新方法键合相色谱法通过将不同的有机官能团通过化学反关于反相色谱的分离机理吸附色谱的作用机制认为溶质在固定相上的保留主要是疏水作用在高效液相色谱中又被称为疏溶剂作用’根据疏溶应共价键合到硅胶载体表面的游离经基上而生成剂理论当溶质分子进入极性流动相后即占据流动相中相应的空间而排挤一部分溶剂分子化学键合固定相化学键合固定相对各种极性溶剂都有良好的化学稳定性和热稳定性由它制备的色,当溶质分子被流动相推动与固定相接触时溶质分子的非极性部分或非极性因子会将非极性固定相上附谱主柱效高使用寿命长重现性好几乎对各种类型的有机化合物都呈现良好的选择性并可用于梯度洗脱操作消除了分配色谱法的缺点着的溶剂膜排挤开而直接与非极性固定相上的烷基官能团相结合吸附形成缔合络合物构成单根据键合固定相和流动相相对极性的强弱可分子吸附层这种疏溶剂的吸附作用是可逆的当流动相极性减少时这种疏溶剂斥力卜降会发生解缔并将溶质分子解放而被洗脱下来上述疏溶将键合色谱法分为正相键合色谱法和反相键合色谱法反相键合色谱法即反相高效液相色谱在正相键合色谱法中键合固定相的极性大于流动相的极性适用于分离油溶性或水溶性的极性和强极性化合物在反相键合相色谱法中键合固定相的极性小于流动相的极性适用于分离非极性极性或剂作用机制可如图所示反相色谱中疏水性越强的化合物越容易从流动相中挤出去在色谱柱中滞留时间也长所以反相色谱法中不同的化合物根据它们的疏水特性得到分离反相色谱法适于分离带有不同疏水基团的离子型化合物其应用范围也比正相键合相色谱法··,口宁淤必刃从铭为幽勺韶字男娜化合物亦即非极性基团的化合物此外反相色溶的有机溶剂以得到不同强度的流动相这些有谱法可用于分离带有不同极性基团的化合物通过改变流动相的溶剂及其组成和可以机溶剂称为修饰剂反相色谱中最常用的有机溶剂有甲醇和乙睛此外以影响溶乙醇四氢吠喃异丙醇及质分子与流动相的相互作用为改变它们的滞留行二氧六环也常被用作修饰剂另外反相色谱中水的流动相中占的比例伸缩影响溶质保留值的三个因素性很大可以从从而使反相色谱可用于烷基键合固定相对每种溶质分子缔合作用和解缔作用能力之差的保留值水溶性脂溶性化合物的分离反相色谱法中的固就决定了溶质分子在色谱过程定相是被共价结合到硅胶载体上的直链饱和烷烃以下简述影响溶质保留值的二个因素其链的长短不同最长的是十八烷基这也是使用溶质分子结构在反相键合相色谱法中溶质的分离是以它们的疏水结构差异为依据的溶质的极性越弱性也强得最多的固定相直链饱和烷烃疏水特性随着碳氢链的长度而增加在反相色谱柱中溶质由于疏疏水保留值越大根据疏溶剂理论溶质的保留值与其分子中非极性部分的总表面积有关其与烷基键合固定相结出的面积愈人保留值越人烷基键合固定相的特性烷基键合固定相的作用在于提供非极性作用表面因此键合到硅胶表面的烷基数量就决定着溶质容量因子的大小烷基的疏水特性随碳链的加长而增加而增人溶质的保留值也随着烷基碳链长度的增加随着烷基碳链的增长增加了键合相的非极性作用的表面积其不仅影响溶质的保留值还影响色谱柱的选择性即随烷基碳链的加长其对溶质分离的选择性也增大流动相性质图反相色谱中固定相表面上溶质分子与烷基键合相之间的缔合作用注流动相的表面张力愈大介电常数愈大其极实心箭头表示缔合物的形成为非极性烷基键合相空心箭头表示缔合物的解缔为溶质分子的极性官能团部分性越强此时溶质与烷基键合相得缔合能力越强为溶剂膜流动相的洗脱强度弱导致溶质的保留值越大为溶质分子的非极性部分应用举例水作用而滞留的时间也将随着碳氢链的长度而增加随着技术的不断改进反相高效液相色谱法获在一般情况下这意味着用碳氢链长的反相色谱得日益广泛的应用要的地位,在高效液相色谱法中也占有重柱能得到较好的分辨率在多数情况下是依靠反复试验选择色谱柱一一由于反相色谱法的固定相是疏水自冬梅等人提出了一种利用反相高效液相色的碳氢化合物溶质与固定相之间的作用土要是非极性相互作用谱法分析米根霉乳酸发酵液中有机酸的方法【’用反相认值应或者说疏水相互作用因此溶剂的色谱柱以强度随着极性降低而增加水是极性最强的溶剂磷酸作为流动相发酵液经稀硫酸预处理后也是反相色谱中最弱的溶剂在反相色谱中常常用直接进样分离定量在果酸内把其中的乳酸苹作基础溶剂向其中加入不同浓度的可以与水混富马酸等完全分离定量各种酸回收率大于分舫砧丁一达交反初筋对展郝庄禅必纂举…妒理麦少不厉卒男雳使性质差别较大的维生素都能得到良好分离使用其实验结果证明该方法能将米根霉乳酸发酵液中乳酸价格便宜的甲醇水为流动相通过改变谱条件值等色苹果酸和富马酸完全分离并准确定量短时间内实现了上述种维生素的分离本方法具有前处理简单干扰小灵敏度高分析该法操作简便迅速可靠测试费用低速度快等优点对于及时测定乳酸发酵过程的变化在环境分析中带硝基的有机化合物被泛地具有重要意义速是测定乳酸发酵液中各有机酸的快用于制造火药这类化合物的大量使用对环境造成严重的污染虽然气相色谱法中常用的各类选择性有效的定量测定方法检测器对于这类化合物的检测有很好的选择性及很高的灵敏度但由于这类化合物的热不稳定性给定量测定带来困难测因此常选用液相色谱法分离检等人发展出不六氢二硝基】三嚓及其重要衍生物的二极管阵列分离测定方法这一方法不仅可以对这些化合物定量而且可以对被测定的化合物提供定性信息图注刀’】图是和及其衍生物的典型分离色谱图标准有机酸混合液在不同流动相条件下的分离色谱图表示流动相为让的表示流动相为草酸为苹果酸几的比表示流动相为。刀表示流动相为的的为为乳酸为乙酸为柠檬酸为富马酸目前获得紫杉醇比较可行的方法是从红豆杉中进行提取分离但由于红豆杉中紫杉醇的含量很低并且存在很多与紫杉醇结构和性质非常接近的紫杉烷伴生物如二尖杉碱这种结构上的细微差别使得紫杉醇和三尖杉宁碱的分离十分困难锥丽娜等人采用正相色谱和反相色谱法相结合的方法在反相色谱中使用了一种新颖的高分子填料成功分离提纯了紫杉醇和二尖杉宁碱到以上纯度达克服了传统方法的缺点’】李来生等人采用反相色谱法同时测定食品中水溶性维生素的含量一,,和,采用柱比甲酸馁甲酸溶液甲醇含图和及其衍生物的反相色谱分离图二乙胺为流动相流速内实现了良好分离和叹户高如瑜等人介绍了用反相液相色谱法定量分析三苯基磷合硅胶柱为流动相乙酞苯胺为内标物苹果及强化奶粉中维生素平均采用反相液相法使用化学键回收率分别为协用乙睛溶解样品流速为用以上甲醇水此试验采用选择性较高的一一固定相作用力适中紫外检测器波长分对愁万宁淤众如妙卒男卿得到了峰形对称重现性好的分离图我泛应用相信会有更好应用前景们将此方法用二苯基磷生产的二艺条件选择和生产质量的定量测定得到满意的结果本方法适参考文献【于世林著高效液相色谱方法及应用北京用于业二苯基磷产品的定量分析由于手性化合物的物理化学工业化学性质相同实现出版社一它们的分离就比较困难如大多数氨基酸都有右旋幻【美斯奈德【法导论柯克兰”著高潮等译现在液相色谱一体和左旋体但往往只能获得右旋体和左旋体的混合物北京化学工业出版社巧即外消旋体对于手性药物往往呈现一种对映体映体具有强的生物活性和药效却无药效而另一种对【美津著李玲颖等著现代液相色谱南开大学出版社】天因此对手性药物对映体的拆一分也是高效液相色谱分析的热点通过改变色谱柱的固定相等人林【王俊德商振华郁蕴露编著高效液相色谱法北在色谱柱内装填由京中国石化出版社一硅胶作基体的手性固定相群殴独特的选择性使【达世禄编著色谱学导论【】武汉武汉大学出版社得右旋体和左旋体得以分离图为使用亲和色谱手性固定相分离肾上腺素受体阻断药安对映体的分析图谱—心得【」金恒亮编高压液相色谱法一北京原子能出版社【朱彭龄云自厚谢光华编著现代液相色谱时兰州大学出版社兰州一一【【英辛普森主编许征帆译实用高效液相色谱法北京中国建筑丁业出版社一【〕下俊德商振华郁蕴露编著高效液相色潜法北京中国石化出版社下北京科学【俞淮乐等编译高效液相色谱固定相「出版社一梦四〔幻孔祥虹有机酸李建华反相高效液相色谱法测定果汁中的理化检验化学分册一【展望通过以上例子彭霞胡晓燕离子对反相色谱法同时测定钢铁及合冶金分析【金中错和铅一可以看出反相高效液相色谱法【白冬梅赵学明胡宗定应用反相高效液相色谱法工业微生物通过将不同的有机官能团通过化学反应共价键合测定米根霉乳酸发酵液中的有机酸到硅胶载体表面的游离经基上而生成不同极性的一化学键合固定相高且具有针对性从而使这种方法的选择性得到提反相高效液相色谱所具有的柱效重现性好【摊丽娜等正相色谱和反相色谱法分离提纯东北红豆杉中紫杉醇和三尖杉宁碱一分析化学学报高使用寿命长几乎对各种类型的有机化合物都呈现良好的选择性并可用于梯度洗脱操作的优点使得在生物化学与工程医药研究下转第页食品分析环境污染和精细化等领域都得到了广分护必工一朦窟卒男辉《涂料涂覆标记》等五项标准已于由国家安全生产监督管理总局提出的一项月份报批油漆与粉刷作业安全规程》安监总政标准制订项目《一一法号通知送审稿四项标准修订项目《涂装作业安全规程术语》一《涂装作业安全规程粉末静电喷涂工艺安全》一《涂装作业安全规程涂漆工艺安全及一其通风净化一守《涂料涂覆标记一经本分标委会组织会议审查通过根据审杏会议要求经修改完成报批稿生产标准化技术委员会己年月日将报批稿及有关材料上报给全国安全雨涂报甘标准化工作科学发展座谈会在京召开月日国家标准委在京召开标准化作科学发展座谈会国家质检总局党组成员国家标准委土任纪正昆在座谈会上指出要牢固树立定位倡导个观念一是要牢固树立服务观念明确标准化作的指导思想和二是要“三个服务”即标准化工作必须服务于经济建设服务于社会需求服务于科学发展牢固树立科学的观念解决工作方式方法的问题在〔作中要坚持科学客观牢固树立法制观念纪正昆提出公正协调的原则二是当前要抓好件大事一是制定好国家技术标准战略发展纲要作为今后全国标准化作科学发展的纲领和方向二是进一步健全和完善国家标准体系形成系统完善相互衔接重点突出层次分明适应国家经济建设和社会发展需要的国家标准体系三是尽快修改出台新的《标准化法》拓展法的调整范围更好地对标准的制定实施和监督实行法制管理陈俊玲几转第页【李来生张江华反相高效液相色谱法测定食品中水分析测试学报【高如瑜祝凌燕反相液相色谱分析三苯幕磷精细一溶性维生素的含量,石油化工一靳东月反相色谱在环境分析中的应用学报论从中山大学场一一’一,,一分淤常